胃癌是我国高发的恶性肿瘤之一，其有效治疗措施主要包括手术治疗及药物化疗，术后的胃癌复发、化疗中肿瘤的耐药是当前急需解决的问题[1-3]。姜黄素是从姜科植物中提纯的酚类成分，具有抗炎、抗氧化及抗肿瘤作用[4]。本文通过使用姜黄素处理正常胃上皮细胞GES-1、高分化胃腺癌细胞MKN28、中分化胃腺癌细胞SGC-7901、低分化胃腺癌细胞MKN45，并对其生长增殖、迁移及侵袭能力的改变进行分析，为临床治疗提供理论支持。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞系 胃正常上皮GES-1细胞购自北京肿瘤细胞研究所；高分化胃腺癌MKN28细胞、中分化胃腺癌SGC-7901细胞、低分化胃腺癌MKN45细胞，均购自齐氏生物科技公司。GES-1细胞常规培养于含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基中，MKN28、SGC-7901、MKN45常规培养于含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中。

1.1.2 主要试剂 DMEM高糖培养基、RPMI 1640培养基购自Gibco公司，胎牛血清购自MRC公司，MTT购自Biotopped公司，Hoechst 33342、鼠尾胶原购自Solarbio公司，姜黄素购自Sigma公司。

9年前，在重庆市巫溪县，龚正银的爸爸患病住了院，尽管花光了家里的所有积蓄为他治病，但最后他还是去世了。2年后，龚正银的哥哥不幸溺水身亡，家里只剩下龚正银和妈妈俩人相依为命。那年，龚正银14岁，家中接二连三遭遇变故，他不得不辍学。为了生计，妈妈准备带着他去合肥打工，但恰巧当时妈妈的手机欠费停机，不方便与合肥的亲戚联系。龚正银对妈妈说：“我试一试去移动营业厅赊话费。”说完，龚正银就出门了。

1.2 方法

中国教师：屈局长，您好！上任之初，您曾说过，广州的教育发展水平应该与广州这座国家中心城市的地位和形象相匹配。近几年来，广州教育有了长足发展，形成了较好的态势分布。能谈谈您对广州教育布局的思考吗？

1.2.1 MTT检测细胞抑制率 取无药培养至对数生长期的GES-1、MKN28、SGC-7901、MKN45细胞，配成浓度约每毫升4×104个的单细胞悬液，接种于96孔板中，每孔加入的细胞悬液为100 μL。将细胞培养至贴壁后分为2组分别进行实验：(1)空白对照组：加入等体积的DMEM高糖培养基(GES-1)或RPMI 1640培养基(MKN28、SGC-7901、MKN45)；(2)实验组：加入姜黄素溶液100 μL，使其终浓度依次为 10、20、30、40、80 μmol/L(GES-1)，20、40、80、160 μmol/L(MKN28)，10、20、25、30、40 μmol/L(SGC-7901)，10、20、40、80、160μmol/L(MKN45)；每组设6个复孔。37 ℃ 5%CO2、水蒸气饱和培养条件下，继续培养24、48及72 h。终止培养后分别加入5 mg/mL的MTT溶液每孔为20 μL，继续原条件培养4 h。终止培养后，弃上清，每孔加入150 μL DMSO，放入水平摇床上振荡10 min，570 nm波长检测吸光度OD值。实验重复3次，按公式求细胞抑制率：细胞抑制率=1-(处理组A570 nm值/对照组A570 nm值)×100%。

1.2.2 Hoechst 33342染色 取培养至对数生长期的GES-1、MKN28、SGC-7901、MKN45细胞，配成每毫升4×104个单细胞悬液，接种于含玻片的24孔板中，每孔加入细胞培养液 500 μL。待细胞贴壁于玻片后进行加药处理。实验分为2组：空白对照组和实验组。空白对照组加入500 μL含有10%胎牛血清的DMEM培养基或RPMI 1640培养基，实验组分别加入含姜黄素溶液及10%胎牛血清的培养基，姜黄素终浓度依次为20、40、80 μmol/L(GES-1)，20、80、160 μmol/L(MKN28)，20、30、40 μmol/L(SGC-7901)，40、80、160 μmol/L(MKN45)，每组设3个复孔。37 ℃，5%CO2、水饱和的条件下培养箱培养24 h。24 h后弃培养液，加入200 μL 4%多聚甲醛室温固定15 min。吸出多聚甲醛，用生理盐水清洗3次，加入100 μL稀释后的Hoechst 33342染液，作用15 min。弃染液，生理盐水液清洗3次，抗荧光淬灭剂封片后倒置荧光显微镜下观察细胞的形态。

1.2.3 Transwell细胞迁移实验 取培养至对数生长期的GES-1、MKN28、SGC-7901、MKN45细胞，配成每毫升5×104个单细胞悬液。实验分为2组：空白对照组和实验组。空白对照组Transwell上室中加入200 μL各细胞悬液，下室中加入含10%胎牛血清的培养基500 μL；实验组Transwell上室中加入200 μL各细胞悬液，下室中加入含姜黄素及10%胎牛血清的培养基，并使其终浓度分别为20、40、80 μmol/L(GES-1)，20、80、160 μmol/L(MKN28)，20、30、40μmol/L(SGC-7901)，40、80、160 μmol/L(MKN45)。每组设2个复孔。37 ℃ 5%CO2、水饱和的条件下培养箱培养24 h。24 h后弃去培养基，甲醇固定20 min，Giemsa染色1 h，洗净后棉签拭去上室细胞，倒置显微镜下分别拍照计数100倍下各复孔随机4个视野的穿膜细胞数。

1.2.4 Transwell细胞侵袭实验 取培养至对数生长期的GES-1、MKN28、SGC-7901、MKN45细胞，配成每毫升5×104个单细胞悬液。按Solarbio公司鼠尾胶原使用说明书推荐方法于Transwell制备三维胶，每孔加入50 μL三维胶，铺匀后放入37 ℃细胞培养箱，12 h后取出，于超净台吸取残余液体，无菌D-Hanks液清洗2次后使用。实验分为2组：空白对照组和实验组。空白对照组Transwell上室中加入200 μL各细胞悬液，下室中加入含10%胎牛血清的培养基500 μL；实验组Transwell上室中加入200 μL各细胞悬液，下室中加入含姜黄素及10%胎牛血清的培养基，并使其终浓度分别依次为20、40、80 μmol/L(GES-1)，20、80、160 μmol/L(MKN28)，20、30、40 μmol/L(SGC-7901)，40、80、160 μmol/L(MKN45)。每组设2个复孔。37 ℃ 5%CO2、水饱和的条件下培养箱培养24 h。24 h后弃去培养基，99%甲醇溶液固定20 min，Giemsa染色1 h，洗净后棉签拭去上室细胞，倒置显微镜下分别拍照计数100倍下各复孔随机四个视野的穿膜细胞数。

1.3 统计学分析 实验结果用表示，所有实验均重复3次。所有数据均采用SPSS 20.0统计软件进行单因素方差分析，多组之间两两比较采用LSD-t检验法。P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 姜黄素对胃正常上皮GES-1细胞、胃腺癌MKN28、SGC-7901、MKN45细胞的增殖抑制作用 姜黄素对正常胃上皮细胞及不同分化程度胃腺癌细胞均有增殖抑制作用，实验结果显示，与正常对照组相比，姜黄素实验组的细胞增殖能力受到抑制(P<0.05或P≤0.01)，且呈时间及剂量的依赖性(表1～4)。

2.4 不同b值下鉴别肺部结节良恶性的ROC曲线分析 将不同b值下ADC 3组鉴别肺部结节良恶性的情况作ROC曲线，ROC曲线显示同特异性情况下b值为400 s/mm2时的敏感度最高，见图1。b值为400 s/mm2时ROC曲线下面积最大，不同b值间ADC阈值及敏感度相比较，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表4。

不断夯实监管基础。宜昌市局认真落实“党政同责”“四有两责”要求，全市增加食品药品监管人员编制636个，111个乡镇（街办）和大型农产品批发市设立食品药品监管所，75%达到“十个一”标准。2016年3月21日，在全国食安办主任座谈会上，国家食品药品监管总局局长毕井泉对宜昌市“四有两责”工作予以充分肯定。

 

表1 姜黄素对胃正常上皮GES-1细胞增殖抑制作用

  

分组空白对照组姜黄素(μmol/L)1020304080OD值 24h1．126±0．0941．038±0．023∗0．949±0．030∗∗0．596±0．024∗∗0．504±0．023∗∗0．411±0．021∗∗ 48h1．524±0．1371．321±0．066∗∗1．108±0．046∗∗0．050±0．026∗∗0．430±0．025∗∗0．353±0．028∗∗ 72h2．452±0．1642．027±0．027∗∗1．628±0．027∗∗0．580±0．072∗∗0．520±0．047∗∗0．407±0．051∗∗IR(%) 24h-7．815．747．155．263．5 48h-13．327．367．071．876．8 72h-17．333．676．378．883．4

与空白对照组相比，*P<0.05，**P<0.01

 

表2 姜黄素对高分化胃腺癌MKN28细胞增殖抑制作用

  

分组空白对照组姜黄素(μmol/L)204080160OD值 24h0．985±0．0360．736±0．109∗∗0．559±0．049∗∗0．402±0．037∗∗0．223±0．009∗∗ 48h1．881±0．2561．212±0．113∗∗0．755±0．078∗∗0．217±0．017∗∗0．199±0．014∗∗ 72h2．398±0．0631．465±0．074∗∗0．791±0．030∗∗0．158±0．006∗∗0．187±0．007∗∗IR(%) 24h-25．243．359．277．3 48h-35．559．984．489．4 72h-38．967．893．492．2

与空白对照组相比，**P<0.01

 

表3 姜黄素对中分化胃腺癌SGC-7901细胞增殖抑制作用

  

分组空白对照组姜黄素(μmol/L)1020253040OD值 24h1．461±0．0721．415±0．095∗1．028±0．046∗∗0．921±0．032∗∗0．891±0．056∗∗0．582±0．055∗∗ 48h1．923±0．0911．832±0．154∗1．312±0．088∗∗1．025±0．085∗∗0．878±0．046∗∗0．534±0．032∗∗ 72h2．526±0．0542．356±0．138∗∗1．220±0．035∗∗1．085±0．058∗∗0．945±0．054∗∗0．058±0．032∗∗IR(%) 24h-3．129．637．039．060．2 48h-4．731．846．754．372．2 72h-6．751．757．062．677．0

与空白对照组相比，*P<0.05，**P<0.01

 

表4 姜黄素对低分化胃腺癌MKN45细胞增殖抑制作用

  

分组空白对照组姜黄素(μmol/L)10204080160OD值 24h0．504±0．0780．450±0．011∗∗0．377±0．009∗∗0．349±0．015∗∗0．297±0．006∗∗0．225±0．020∗∗ 48h1．011±0．0930．829±0．011∗∗0．718±0．012∗∗0．642±0．020∗∗0．447±0．041∗∗0．358±0．025∗∗ 72h1．935±0．0441．306±0．053∗∗0．999±0．044∗∗0．679±0．054∗∗0．571±0．032∗∗0．509±0．016∗∗IR(%) 24h-10．725．330．740．953．3 48h-18．028．936．455．864．8 72h-32．548．464．970．573．7

与空白对照组相比，**P<0.01

2.3 姜黄素对胃正常上皮GES-1细胞、胃腺癌MKN28、SGC-7901、MKN45细胞迁移侵袭能力的影响 姜黄素在相对较低浓度时可对胃正常GES-1细胞有促进迁移及侵袭的作用(姜黄素浓度20、40 μmol/L，P<0.05)，姜黄素在高浓度时呈抑制迁移和侵袭的作用(80 μmol/L，P<0.05)。姜黄素对高、中、低分化的胃腺癌细胞作用则呈相同趋势，随着姜黄素浓度的增加，胃腺癌细胞的迁移及侵袭能力受到抑制(P<0.05，图5、6)。

3 讨论

姜黄素是从姜黄属植物如姜黄、莪术、郁金和石菖蒲等中药中提取的单体[5-7]，其可发挥很多药理作用，包括抗炎抗氧化、清除自由基、抗纤维化、保护肾脏和肝脏以及抗癌、防癌的作用。此外，姜黄素最突出的作用为逆转肿瘤的耐药问题[8-9]。

 

图1 姜黄素处理GES-1细胞后出现凋亡征象：A.空白对照组；B.20 μmol/L组；C.30 μmol/L组；D.40 μmol/L组 图2 姜黄素处理MKN28细胞后出现凋亡征象：A.空白对照组；B.20 μmol/L组；C.80 μmol/L组；D.160 μmol/L组 图3 姜黄素处理SGC-7901细胞后出现凋亡征象：A.空白对照组；B.20 μmol/L组；C.30 μmol/L组；D.40 μmol/L组 图4 姜黄素处理MKN45细胞后出现凋亡征象：A.空白对照组；B.40 μmol/L组；C.80 μmol/L组；D.160 μmol/L 组

  

图5 Transwell细胞迁移实验

  

图6 Transwell细胞侵袭实验

[7] 韩金荣，张林西. 姜黄素抗肿瘤机制[J]. 国际肿瘤学杂志, 2013,40(11):823-826.

实验结果显示，姜黄素作用于胃正常上皮及胃腺癌细胞系时有不同的结果，提示姜黄素对于正常细胞的作用机制可能与作用于胃癌细胞的不一致，而目前有关姜黄素对于胃正常上皮GES-1细胞的研究相对较少，尚需要进一步深入探索。研究表明，姜黄素的抗癌、防癌机制包括以下3个方面：(1)诱导癌细胞凋亡[10]，如调控癌基因BCL-2、p53的表达，诱导细胞周期阻滞。此外，姜黄素可通过下调PI3K/AKT/mTOR通路抑制人肝癌细胞系HL-7702的增殖[11]，并呈剂量依赖的趋势，同样的实验结果被证实于A549及PC-9细胞[12]。目前姜黄素在胃癌的研究主要集中于SGC-7901、SGC-823、MGC-803细胞系上，研究结果显示，姜黄素对SGC-7901细胞的增殖抑制作用可能与Cox-2途径相关，姜黄素对体外培养的高表达Cox-2蛋白的SGC-7901细胞有明显的增殖抑制作用，而Cox-2蛋白在消化道肿瘤的发生、发展中有着关键性作用[13-14]；此外，姜黄素还可下调PI3K及p-AKT的表达，从而达到抑制SGC-7901细胞增殖作用[15]；在MGC-803及SGC-823细胞中的研究也证实相应结果[16-17]。此外，有研究表明姜黄素对MKN45细胞的作用可能与Hedgehog信号通路相关[18]。姜黄素诱导细胞凋亡的机制还可能与抑制NF-κB活化、STATs通路及MAPK通路的活性等密切相关。(2)抑制肿瘤的侵袭以及转移，其可能机制为抑制肿瘤血管形成及调节黏附分子表达；在小鼠艾氏腹水癌中的研究显示，姜黄素可通过抑制VEGF及其相应受体，阻止肿瘤血管的形成；而姜黄素抑制癌细胞的迁移及侵袭能力则与调节上皮-间质转换和间质-上皮转换之间的相关因子如E-钙黏蛋白、内皮源性血管黏附分子等的表达水平相关[19]。(3)逆转细胞的耐药性，从而提高化疗的敏感性；手术切除是胃癌治疗的重要手段之一，而药物化疗也是不可缺少的一部分，同样近年来肿瘤耐药性的问题受到越来越多的关注，研究者在视网膜母细胞Y79细胞中的研究表明，姜黄素可抑制MDR1基因的表达和功能，从而达到增加肿瘤细胞对化疗药物敏感性的效果[20]；同样，在肝癌耐药细胞株Bel7402/5-Fu中的研究亦证实同样结果[21]。

KANG Zi-jian, LIU Ya-qun, ZHANG Zhi-guo, LIU Yao-yang, XU Hu-ji

综上所述，我们考虑不同分化程度的胃腺癌细胞对姜黄素的反应不一，但目前仅为体外细胞实验结果，其具体的剂量作用以及在动物实验研究是我们下一步的实验设想。此外，应用姜黄素治疗时，其所引起的正常组织形态、功能改变及相关分子机制亦是我们关注的问题。

参考文献：

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最后，农业新型经营主体发展壮大，促进了农村一、二、三产业的融合发展。目前，全市农业龙头企业670家、农民合作社2 333家、家庭农场1 280家，由此促进了农业规模化、集约化、现代化发展。

[5] 李志国，王春江，崔 洋. 姜黄素抗肿瘤作用研究进展[J]. 中华临床医学杂志, 2013,7(19):8878-8881.

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[4] 鲍华英，陈荣华. 姜黄素研究进展[J]. 国外医学儿科学分册, 2003,30(5):254-256.

本实验中，姜黄素除对胃腺癌细胞的增殖及细胞迁移侵袭能力有影响外，还可引起正常胃上皮细胞的凋亡及增殖抑制，提示我们在使用姜黄素进行临床治疗时必须考虑姜黄素的剂量问题。使用姜黄素处理胃正常上皮GES-1后，可发现与处理胃腺癌细胞不同的结果，当姜黄素浓度为20、40 μmol/L时，虽然此时GES-1细胞已出现增殖的抑制现象(MTT)及凋亡小体的形成(Hoechst染色)，但其迁移及侵袭能力却随姜黄素浓度的增加而增加(P<0.05)，提示姜黄素可能存在促进正常细胞发挥其某些生理功能的作用。姜黄素处理MKN2、SGC-7901、MKN45细胞时，其结果出现类似趋势，即随着姜黄素浓度的增加，细胞抑制率(MTT)、凋亡小体的形成(Hoechst染色)、细胞迁移及侵袭能力均受到抑制，且随着剂量的增大而增加(P<0.05)，相较于MKN28和MKN45细胞而言，SGC-7901细胞在姜黄素较低浓度时便可出现明显的细胞增殖抑制及凋亡小体形成。本实验在姜黄素浓度为30 μmol/L时，Transwell细胞迁移与侵袭实验组SGC-7901细胞的穿膜细胞数为0，而GES-1细胞的迁移及侵袭能力在此浓度时与正常组相比得到增强，说明在使用姜黄素治疗中分化胃腺癌过程中，当血药浓度为30 μmol/L时，可发挥其抗癌作用，同时对胃正常上皮细胞影响较小。

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[9] Jordan B C, Mock C D, Thilagavathi R, Selvam C. Molecular mechanisms of curcumin and its semisynthetic analogues in prostate cancer prevention and treatment[J]. Life Sci, 2016,152:135-144.

[10] Deng Y I, Verron E, Rohanizadeh R. Molecular mechanisms of anti-metaatatic activity of curcumin[J]. Anticancer Res, 2016,36(11):5639-5648.

虚拟现实（Virtual Reality）简称VR，是一种比普通模拟技术更为高级的模拟仿真技术。它利用计算机技术建立一种更为逼真的三维虚拟环境，让用户有一种“身临其境”的感觉，高端的虚拟现实除了提供视觉和听觉感受外，还提供触觉、嗅觉等感受。更为重要的是，在这样的环境中，用户还能够与环境或其中的对象实时交互，如漫游虚拟世界、操作虚拟设备等。这种技术在计算机辅助教学、网络教学和模拟训练等领域具有广阔的应用前景。在网络课件中用到的虚拟现实技术主要有VRML、Web3D和虚拟全景，Web3D是用于网络环境的实时三维技术，广义的Web3D包括VRML和虚拟全景。

[11] 邓进巍，刘 燕，郭辛翔，等. 姜黄素下调PI3K/AKT/mTOR通路抑制人肝癌细胞系增殖[J]. 基础医学与临床, 2016,36(9):1274-1279.

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经过预处理后，缺陷已被清晰地呈现出来。为了识别出缺陷，需要对缺陷的特征进行提取，提取的特征量能否准确地描述缺陷，这对后续的识别具有关键作用。

[14] 司 宏，徐艳艳. 姜黄素对人胃癌SGC-7901细胞增殖及COX-2 mRNA和COX-2蛋白表达的影响[J].中国医院用药评价与分析, 2010,10(12):1089-1091.

2.2 Hoechst 33342荧光核染色法观察姜黄素对胃正常上皮GES-1细胞、胃腺癌MKN28、SGC-7901、MKN45细胞的形态学改变影响 正常细胞呈卵圆形，弥散均匀的蓝色荧光。实验组细胞的细胞核有不同程度的凋亡，即细胞核破裂、产生大小不等、形态不规则的碎片，呈半月状或梅花状、亮度增强的蓝色荧光凋亡小体。实验结果表明，姜黄素对于正常胃上皮及不同分化程度的胃癌细胞均引起其凋亡作用，且姜黄素浓度越大，凋亡小体越明显，且在姜黄素浓度为40 μmol/L时，可明显引起中分化胃腺癌细胞SGC-7901的明显凋亡特性，出现大量大小不等、形态不规则的碎片状亮度增强的蓝色荧光凋亡小体，同时实验结果提示，姜黄素对胃正常上皮细胞也可引起其凋亡的作用(图1～4)。

[15] 陈立加，黄景彬，高卓维. 姜黄素通过PI3K/AKT信号通路抑制胃癌细胞增殖和诱导细胞凋亡[J]. 湖北中医杂志, 2016,38(9):4-8.

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单环刺螠（Urechis unicinctus）隶属于螠虫动物门（Echiuroidea），俗称为海肠、海肠子，因营养成分与海参相似，有“裸体海参”的美誉，主要分布在我国以及日本和朝鲜沿海地区的泥滩或岩石缝中[1]。在我国，山东烟台海域产量最大，“烟台海肠”于2013年4月正式获批中华人民共和国农产品地理标志[2]。

[18] 孙晓东，刘杏娥. 姜黄素抑制Hedgehog信号诱导胃癌细胞凋亡[J]. 全科医学临床与教育, 2012,10(4):367-369.

本工程选矿工艺中磨机电机等设备需要大量冷却水冷却，因此需设置循环冷却水系统。冷却循环水管道系统，包括冷却循环给水管道系统及冷却循环回水管道系统。冷水通过冷却循环给水管道输送至选矿设备，冷却排出的升温水通过冷却循环回水管道输送至冷却塔进行冷却，冷却后进冷水集水池循环使用。

[19] Guo Y, Yin J, Zha L, Wang Z. Clinicopathological significance of platelet-derived growth factor B, platelet-derived growth factor receptor-β, and E-cadherin expression in gastric carcinoma[J]. Contemp Oncol (Pozn), 2013,17(2):150-155.

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三是组织全民义务植树活动。以“绿水青山就是金山银山”为理念，将义务植树活动与“三年增绿计划”、“绿满河口·美丽家园”国土绿化行动结合起来，以3月12日植树节为契机，广泛组织全区各大领导班子、机关干部，以及各事、企业单位职工共2000多人到义和镇六顷村参加义务植树活动，栽植白蜡苗木7230株，集中造林65.7亩。同时，动员全社会力量参与义务植树活动，“青年林”、“巾帼林”等纪念林建设，庭院绿化、城镇绿化及村庄绿化齐头并进。目前，全区义务植树35万株，已完成全年任务。

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