胃癌是常见的恶性肿瘤之一，其发生、发展涉及多种复杂机制，其中包括细胞死亡、细胞增殖等。细胞凋亡是一种被特异性的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspases家族)激活的细胞死亡形式，由于细胞凋亡的形式需严格控制，故Caspase家族的活性也需受严格调控。Caspase-8是死亡受体介导的细胞凋亡中的启动因子。近年多项研究发现，在大多数恶性肿瘤中Caspase-8均呈低表达，其促凋亡活性也是降低的[1]。TRAF2是生物学上重要的细胞凋亡抑制因子，Petersen等[2]研究发现在小鼠体内、外纤维肉瘤细胞中敲除TRAF2基因后，Caspase-8表达上调，小鼠存活率增加。TRAF2有可能通过某种途径下调Caspase-8表达，从而参与胃腺癌的发生、发展。TRAF2与Caspase-8在胃腺癌中是否存在这种关系，目前尚不清楚。本实验通过Western blot及qRT-PCR技术检测TRAF2和Caspase-8 mRNA及蛋白在胃腺癌组织中的表达，并探讨两者之间的相关性。

宋朝时期饮茶方式更加细腻化，仪式化，当时较流行的打茶，具有28道工序，斗笠形状以大碗为打茶器皿（称之为茶盏），茶饼磨成细粉，放置碗内冲进开水调成泥糊膏状，再用竹制打茶器（形状像精细扫把）顺时针、逆时针不断在茶盏中旋转抹打。使盏中泛起汤花，以比较茶汤的色、香、味。最后再品尝汤花，俱佳者获胜。是以“斗茶”来比赛茶叶的质量，比赛茶汤的色、香、味，比赛斗茶者的茶技、茶艺。宋朝打茶仪式感观赏性很强，是东方茶文化的代表。在宋朝通过打茶来斗茶是非常流行，上至皇宫贵族，下至平民百姓都喜爱斗茶。

1 材料与方法

1.1 材料 收集河北省承德多家医院2014年6月～2016年12月存档的胃癌手术切除标本60例，患者术后均经病理证实为胃腺癌。另收集55例癌旁正常胃黏膜组织为对照组，来源于同期经手术切除距病灶边缘>5 cm的胃组织，术后病理证实为癌旁的正常胃黏膜。所有病例病理资料完整。

1.2 试剂 兔抗人TRAF2、Caspase-8均购自武汉博士德公司。提取RNA的TRIzol试剂购自Invitrogen公司，反转录试剂盒和荧光定量试剂盒均购自天根生化科技公司，目的基因引物由大连宝生物公司设计合成。

“我也可以进便宜的肥料，多一些利润，但是我就是没把利润看得太重。我只是一心为农民服务，一心为我们县的老百姓服务。”吉林省乾安县的70岁老太太翟桂芝面对记者的采访时，紧张的神情下透漏出些许年轻人的羞涩，但是说起自己做农资的经历却是滔滔不绝。

螨虫喜欢潮湿的环境，常寄生于动物皮肤较柔软嫩薄之处。仔狐窝箱内没有足够的阳光照射，小环境较为潮湿，加之仔狐耳道内皮肤较为嫩薄，所以该时期的蓝狐仔兽极易发生耳螨病。耳螨病严重者耳道内会化脓，进而引发脑炎，动物表现为间歇性抽搐。

1.3.1 qRT-PCR检测 取新鲜冷冻组织，解冻后取约0.1 g置于事先准备好的匀浆器中，加入Trizol后充分研磨裂解，当组织完全研磨后将裂解液转至1.5 mL无酶离心管中静置、离心并沉淀RNA，提取的RNA溶于DEPC水后测浓度，将测好浓度的RNA反转录为cDNA。按照qRT-PCR试剂盒说明书将所需试剂依次加入八连排中混匀、离心，此过程应注意避光、无酶、冰上操作。人类TRAF2基因片段扩增序列为：上游5′-GATGGAGGCATCCACCTACGA-3′，下游5′-GCCGTTCAGGTAGATACGCAGAC-3′；人Caspase-8基因扩增序列为：上游5′-GGAGGAGTTGT GTGGGGTAATG-3′，下游5′-CGAGGTTTGCTTTTCA TTTGGT-3′；GAPDH设为内参，基因序列为：上游5′-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3′，下游5′-TGGTGAA GACGCCAGTGGA-3′。将加好混合物的八连排管置于实时荧光定量PCR仪中，设定参数25 μL体系，95 ℃ 30 s、95 ℃ 5 s、60 ℃ 30 s，待反应结束后收集数据。采用2-△△Ct法计算mRNA的相对表达量：ΔΔCt=(Ct目的基因-Ct内参)肿瘤组织-(Ct目的基因-Ct内参)正常组织。

Caspase-8是一个经典的细胞凋亡调节因子，属于外源性细胞凋亡途径中关键启动子。Wang等[8]在脑胶质瘤细胞中过表达Caspase-8因子后抑制肿瘤的生长，促进肿瘤细胞凋亡。Caspase-8在恶性肿瘤中的研究较广泛，在多数恶性肿瘤中其活性及表达量降低。Caspase-8表达下调的机制复杂，有研究表明Caspase-8基因多态性或启动区甲基化可引起Caspase-8表达异常[9]，Caspase-8蛋白被降解也可导致Caspase-8表达下调。本组结果显示Caspase-8蛋白、mRNA在胃腺癌组织中下调，且Caspase-8蛋白表达与胃腺癌分化程度、分期、淋巴结转移及浸润深度等临床病理特征相关，与沈俊俊等[10]研究结果不一致，可能与实验方法不同有关，本实验采用Western blot法检测不同胃组织中Caspase-8蛋白的表达，而沈俊俊等[10]研究采用免疫组化法。

TRAF2即肿瘤坏死因子受体相关因子2，人TRAF2定位于9q34.3，编码501个氨基酸组成的相对分子质量为5.6×104的蛋白，广泛表达于多种类型细胞。TRAF2蛋白主要在TNF-α介导的信号通路中与TNFR、cIAP-1、RIP等结合形成复合物激活JNK、NF-κB通路。目前研究表明TRAF2在多种恶性肿瘤中表达上调，参与癌症的发生、发展。Zhao等[5]在乳腺癌中发现TRAF2因子表达上调，且上调的TRAF2可促进乳腺癌细胞的侵袭及转移。在前列腺癌中，Wei等[6]也发现TRAF2表达同样上调，且经过生存分析后表明TRAF2表达与前列腺癌患者预后相关。TRAF2被认为是一个抗凋亡因子，在胃腺癌中的表达研究较少。本实验结果显示，采用Western blot技术检测TRAF2蛋白在胃腺癌组织中表达(1.41±0.59)明显高于正常胃黏膜组织(0.48±0.10)，两者差异有统计学意义，且与胃腺癌分化程度、TNM分期、淋巴结转移及浸润深度等临床病理特征相关；qRT-PCR技术检测TRAF2 mRNA的表达水平变化与其蛋白水平变化一致。与Zhao等[7]结果一致，均提示TRAF2表达水平的上调与胃腺癌发生、发展密切相关，但TRAF2因子上调机制尚不清楚。

综上所述，胃腺癌的发生、发展机制与TRAF2、Caspase-8异常表达相关；TRAF2、Caspase-8蛋白与胃腺癌分化程度、分期、淋巴结转移及浸润深度密切相关，联合检测TRAF2、Caspase-8有可能为胃腺癌的诊治提供新的理论依据。

1.4 统计学方法 采用SPSS 19.0软件进行统计学分析，资料类型为正态分布时采用表示，非正态分布采用中位数[M(IQR)]表示。两样本比较采用t检验和非参数Wilcoxon秩和检验；相关性分析采用Pearson相关分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.2 TRAF2、Caspase-8蛋白在胃腺癌及癌旁正常胃黏膜组织中的表达 采用Western blot法检测TRAF2、Caspase-8蛋白在胃腺癌组织及癌旁正常胃黏膜组织中的表达，结果发现在胃腺癌及癌旁正常胃黏膜组织中TRAF2蛋白表达量分别为1.41±0.59、0.48±0.10，两者差异有统计学意义(t=6.17，P<0.05)，Caspase-8在胃腺癌及癌旁正常胃黏膜组织中蛋白相对表达量分别为0.62±0.25、2.09±0.82，两者差异有统计学意义(t=3.92，P<0.05)；随分化程度的降低，TRAF2蛋白表达增加，而Caspase-8表达下调(图3)。

藻株进化树的构建：将测序序列在NCBI数据库中进行BLAST同源性比对分析，下载相关序列，使用MEGA7.0软件，采用邻接法构建藻株进化树。

2.1 TRAF2、Caspase-8 mRNA在胃腺癌及癌旁正常胃黏膜组织中的表达 胃腺癌组织中TRAF2 mRNA相对表达量为[11.24(4.93)]，显著高于癌旁正常黏膜组中的相对表达量[0.93(1.90)](Z=56.00，P<0.05)。Caspase-8 mRNA在胃腺癌组和癌旁正常胃黏膜组中的相对表达量分别为[0.17(0.30)]和[1.21(1.07)]，即与正常胃黏膜组相比，胃腺癌组中Caspase-8 mRNA相对表达量显著下调(Z=3.00，P<0.05，图1、2)。

  

图1 qRT-PCR法检测TRAF2 mRNA(A)、Caspase-8 mRNA(B)、在不同胃组织中的相对表达量

2.3 TRAF2与Caspase-8表达的相关性及与胃癌临床病理特征的关系 TRAF2、Caspase-8蛋白在胃腺癌中的表达量呈负相关(rs=-0.68，P<0.05)；TRAF2、Caspase-8 mRNA的相对表达量在胃腺癌组织中差异无统计学意义(P>0.05)。将两者的蛋白表达与胃腺癌临床病理特征进行相关性分析，发现胃腺癌组织中TRAF2及Caspase-8蛋白表达均与患者性别、年龄无关(P>0.05)；与分化程度、淋巴结转移、TNM分期及浸润深度有关(P<0.05，表1)。

3 讨论

胃癌位居常见恶性肿瘤的第2位，其病死率位居性肿瘤的第3位[3]，预后较差，5年生存率仅为5%～20%[4]。胃腺癌是胃癌中最多见的类型，逃避免疫监视、抵抗细胞凋亡等可影响胃腺癌的发生、发展，其发生机制中包括肿瘤坏死因子等诱导的肿瘤细胞凋亡。TRAF2和Caspase-8与TNF、TRAIL等细胞因子诱导的细胞凋亡途径密切相关。

 

图2 GAPDH、TRAF2和Caspase-8 mRNA在胃腺癌组织和癌旁正常胃黏膜组织中的表达：A.GAPDH扩增曲线；B.GAPDH溶解曲线；C.TRAF2扩增曲线；D.TRAF2溶解曲线；E.Caspase-8扩增曲线；F.Caspase-8溶解曲线

 

表1 TRAF2、Caspase-8蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系

  

临床病理特征nTRAF2蛋白相对表达量t值P值Caspase⁃8蛋白相对表达量t值P值性别 男351．58±0．351．89>0．050．65±0．251．01>0．05 女251．42±0．200．93±0．66年龄(岁) ≥60401．76±0．561．84>0．050．68±0．330．99>0．05 <60201．23±0．400．94±0．67分化程度 高+中151．07±0．342．80<0．051．01±0．562．57<0．05 低451．75±0．600．46±0．15淋巴结转移 有381．68±0．109．43<0．050．51±0．183．26<0．05 无221．40±0．121．24±0．48TNM分期 Ⅰ+Ⅱ221．34±0．214．56<0．051．23±0．503．09<0．05 Ⅲ+Ⅳ381．72±0．340．52±0．19浸润深度 <浆膜层271．41±0．234．79<0．051．14±0．502．98<0．05 ≥浆膜层331．72±0．250．50±0．19

 

图3 Western blot法检测不同胃组织中TRAF2、Caspase-8蛋白的表达：1.低分化胃腺癌； 2.高+中分化胃腺癌；3.正常胃黏膜

1.3.2 Western blot检测 取新鲜组织适量，按每100 μg组织加入1 mL裂解液计算加入相应量的RIPA组织裂解液，组织研磨仪中充分研磨，离心，提取上清。将提取的总蛋白采用BCA法给予蛋白定量，定量后加入Buffer沸水煮沸15 min，分装保存。配制12%SDS-PAGE胶，上样、电泳，采用孔径为0.45 μm的PVDF膜湿转法转膜，7%奶粉封闭1 h，加入1 ∶200浓度的TRAF2、Caspase-8一抗4 ℃孵育过夜，β-actin为内参，次日37 ℃摇床复温1 h，TBST洗膜5 min×3次，加入二抗孵育1 h，洗膜后ECL法显影。采集图像用Image J软件进行条带灰度值分析，计算目的蛋白相对表达量=目的蛋白灰度值/内参蛋白灰度值。

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TRAF2与Caspase-8均参与TNF-α等介导的外源性细胞凋亡。本实验显示TRAF2在胃腺癌中高表达，而Caspase-8低表达，TRAF2与Caspase-8蛋白表达呈负相关，但mRNA表达在两者间差异无统计学意义，提示在胃腺癌中TRAF2可能通过某种途径在蛋白水平下调Caspase-8蛋白表达。有研究指出TRAF2 蛋白K48位泛素化以及降解活化的Caspase-8蛋白[11]。因此在胃腺癌中，TRAF2也有可能通过泛素化作用降解Caspase-8蛋白表达，从而抵抗细胞凋亡，这还有待于进一步实验明确。

去年我所带的912班，全班有48个学生和12位老师，组成一个团结的大家庭，家庭中每一个成员都有归属感，汇聚成强大的力量。大家本着为集体做事就是为自己做事的原则，一起去做所有的事，一起成长，班级变成了一个成长共同体。学生和老师，你中有我，我中有你，一起快乐、茁壮地成长。有的老师认为这是班主任偷懒，甩包袱，其实，这正是现代班级管理的先进之处。

参考文献：

基于资源整合的农工商双向流通电商模式研究..................................................................................................................................尹 超 张明玉（69）

[1] Fianco G, Mongiardi M P, Levi A, et al. Caspase-8 contributes to angiogenesis and chemotherapy resistance in glioblastoma[J]. Elife, 2017,6: e22593-e22609.

[2] Petersen S L, Chen T T, Lawrence D A, et al. TRAF2 is a biologically important necroptosis suppressor[J]. Cell Death Differ, 2015,22(11):1846-1857.

[3] Zheng R, Zeng H, Zhang S, Chen W. Estimates of cancer incidence and mortality in China, 2013[J]. Chin J Cancer, 2017,36(1):66.

[4] 曹 阓, 范松龙, 张智弘. 胃癌中RBBP4和BCL-2的表达及意义[J]. 临床与实验病理学杂志, 2017,33(10):1070-1073.

1.3 方法

[5] Zhao Z J, Ren H Y, Yang F, et al. Expression, correlation, and prognostic value of TRAF2 and TRAF4 expression in malignant plural effusion cells in human breast cancer[J]. Diagn Cytopathol, 2015,43(11):897-903.

[6] Wei B B, Liang J B, Hu J M, et al. TRAF2 is a valuable prognostic biomarker in patients with prostate cancer[J]. Med Sci Monit, 2017,23:4192-4203.

在当前阶段，要想确保变电站安全稳定运行，就必须要对其进行定期的运行维护。可以说，电气设备是变电站最为重要的一个环节，电气设备的正常运行具有十分重要的作用，直接影响变电站能否稳定工作。变电站的相关电气专职工作人员要不断学习专业技术和专业方法来进行设备的运行维护以及检修，注意相关的安全隐患，从而减少设备发生故障的几率，保证相关设备能够稳定运行对于变电站具有重要意义。以下简要地阐述变电运维现场安全工作的要点及有关措施，希望可以给有关企业和部分可供参考之处。

[7] Zhao J J, Li H J, Min L Q, et al. High expression of tumor necrosis factor receptor-associated factor 2 promotes tumor metastasis and is associated with unfavorable prognosis in gastric cancer [J]. J Gastroenterol Hepatol, 2018,33(2):431-442.

[8] Wang H B, Li T, Ma D Z, et al. Overexpression of FADD and Caspase-8 inhibits proliferation and promotes apoptosis of human glioblastoma cells[J]. Biom Pharmac, 2017,93:1-7.

[9] Zhang Y J, Zhong X P, Chen Y, et al. Association between CASP-8 gene polymorphisms and cancer risk in some Asian population based on a HuGE review and meta-analysis[J]. Genet Mol Res, 2013,12(4):6466-6476.

[10] 沈俊俊, 韩 虹, 李 静, 王燕燕. NF-κB、Caspase-8在胃癌中的表达和临床意义[J]. 胃肠病学, 2012,17(4):226-229.

[11] Gonzalvez F, Lawrence D, Yang B, et al. TRAF2 Sets a threshold for extrinsic apoptosis by tagging caspase-8 with a ubiquitin shutoff timer[J]. Mol Cell, 2012,48(6):888-899.