原发性肝细胞癌(hepatocelluar carcinoma, HCC)是世界上最常见、恶性程度最高的肿瘤之一，发病率位居全球的第5位，病死率位居第3位，我国HCC呈高发状态[1]。HCC起病隐匿，早期即可发生肝内外转移，手术及放、化疗效果有限，预后差。目前认为，恶性肿瘤的侵袭转移与上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)关系密切，而锌指转录因子(Snail)和细胞核转录因子κB(nuclear factor-κB, NF-κB)在EMT中有重要作用。绝大多数HCC患者均经历慢性肝炎、肝硬化、肝癌的转变过程。Luedde等[2]研究发现，NF-κB是串联炎性反应与肿瘤的重要分子，在肝炎向肝癌的发展过程中有重要作用。目前，尚未见Snail和NF-κB的表达与HCC临床病理特征相关的文献报道。本文利用组织芯片及免疫组化技术检测Snail和NF-κB的表达，并分析其与HCC临床病理特征的关系。

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1 材料与方法

1.1 材料 收集兰州军区兰州总医院病理科2008年3月～2016年12月手术切除的HCC，筛选具有肝炎病史的HCC 83例，所有标本术前均未行放、化疗，患者中男性55例，女性28例，年龄22～76岁，平均(59.56±7.65)岁。其中57例伴门静脉癌栓，50例伴淋巴结转移和(或)远处转移。另选取18例正常肝组织标本作对照(排除肝炎的肝血管瘤)。所有标本24 h内取相应癌组织，经10%中性福尔马林固定，常规脱水、石蜡包埋。主要实验试剂：Snail兔抗人多克隆抗体及NF-κB鼠抗人单克隆抗体(浓缩型)购自北京博奥森生物公司；柠檬酸修复液(pH 7.2～7.4)、即用型免疫组化EliVision试剂盒(鼠/兔)(KIT-9923)购自福州迈新公司。

1.2 方法

1.2.1 手工制作组织芯片 所有病例组织蜡块及相应的HE染色病理切片，均在显微镜下寻找典型病变部位后用伊红标记。取20 mL普通注射器针头，磨平针尖，匹配16号骨髓穿刺针针芯在空白蜡块上手工打孔，再根据HE切片上的标记，在供体蜡块相应位置穿刺出组织柱(直径约1.5 mm)放入空白蜡块上打好的孔中编号。重复上述步骤制作6×8列阵组织芯片蜡块5个，每例取2个点位，每个蜡块包含23例标本，开始的2个点位空白为定位标志。4 μm厚常规组织切片，HE染色片可裱贴于普通载玻片上，免疫组化染色用蜡片应裱于阳离子防脱片上。HE染色后复验所得组织芯片的每个位点。

1.2.2 免疫组化 取5个组织芯片各2张，采用免疫组化SP法染色，具体操作步骤严格按试剂盒说明书进行，PBS代替一抗作阴性对照，阳性对照片由试剂公司提供。

参考文献：

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2 结果

2.1 Snail和NF-κB在正常肝组织及HCC中的表达 Snail和NF-κB在正常肝组织中几乎不表达，而在HCC中表达丰富，阳性率分别为80.7%(67/83)和85.52%(71/83)，组间差异有统计学意义(χ2=32.506，χ2=47.502，P均<0.01，表1，图1、2)。

2.1.5 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液10 μL，按照“2.1.1”项下条件重复进样6次，测定10种黄酮的峰面积，结果金丝桃苷、朝藿定B、朝藿定A、朝藿定C、淫羊藿苷、木犀草素、槲皮素、川陈皮素、山柰酚、宝藿苷I峰面积的RSD值分别为1.31%、0.48%、0.25%、0.63%、0.44%、1.81%、1.43%、1.11%、0.41%、0.57%，表明该条件下仪器精密度良好。

 

图1 肝细胞癌中Snail的表达，SP法 图2 肝细胞癌中NF-κB的表达，SP法

2.2 Snail和NF-κB表达与HCC临床病理特征的关系 Snail和NF-κB的表达与患者性别、年龄、部位等无明显关系，组间差异均无统计学意义(P>0.05)；与肿瘤大小、分化程度、远处转移(包括门静脉癌栓及淋巴结转移)和AJCC分期有关，组间差异有统计学意义(P<0.05，表2)。

2.3 Snail和NF-κB在HCC组织中表达的相关性 经Spearman等级相关分析，Snail和NF-κB在HCC中的表达呈正相关(r=0.730，P<0.01，表3)。

 

表1 Snail和NF-κB在正常肝组织及肝细胞癌中的表达

  

分组nSnail-+ χ2值P值NF⁃κB-+ χ2值P值正常肝组织181530032．5060．0001710047．5020．000肝细胞癌831618301912183221

 

表2 Snail和NF-κB表达与肝细胞癌临床病理特征的关系

  

临床病理参数nSnail-～+ ～ χ2值P值NF⁃κB-～+ ～ χ2值P值性别 男5526292．6830．10117381．9360．164 女288201315年龄(岁) ≤604320231．1360．28719242．5000．114 >604014261129肿瘤部位 左肝4721260．6190．43118290．2180．641 右肝3613231224肿瘤最大径(cm) ≤540241611．5690．00121198．9490．003 >5431033934肿瘤数量 单发6224380．5150．47320421．6040．205 多发2110111011分化程度 高241596．4750．01111134．7510．029 中+低5919404217卫星灶 有5621350．8530．35517392．4980．114 无2713141314门静脉癌栓 有5718396．6270．01016415．1400．023 无2616101412淋巴结转移 有5014368．7390．00313375．6070．018 无3320131716AJCC分期 Ⅰ+Ⅱ2615114．3810．0363239．9320．002 Ⅲ+Ⅳ5719382730AFP(μg/L) ≤4002313103．1840．0749140．1230．726 >4006021392139

 

表3 Snail和NF-κB在肝细胞癌组织中表达的相关性

  

SnailnNF⁃κB-+ r值P值-16105100．730<0．001+182952 3003207 1901612

3 讨论

恶性肿瘤的病死率极高，临床上约90%的患者死亡与恶性肿瘤的转移有关[5]。近年研究[6]发现，EMT是恶性肿瘤发生转移的重要机制之一。EMT是一种上皮细胞失去极性，出现间质表型的可逆细胞进程[7-9]，在这一过程中，上皮细胞经历了一系列持续的细胞活动，包括细胞极性消失，细胞间连破坏，细胞骨架重构，细胞形态改变，细胞运动能力提高，降解细胞外基质的能力增加，并且出现间质表型，细胞获得侵袭和转移能力[10]。EMT的发生、发展受多种细胞因子和微环境调控，其中包括锌指Snail[11-12]和细胞NF-κB[13]。

(2)机组给水温度提高后，低负荷工况锅炉SCR脱硝装置入口烟气温度提升至310 ℃以上，可保证SCR在全负荷范围内处于催化剂的高效区运行。

Snail是锌指结构转录抑制因子，最早在果蝇中发现，属于锌指转录因子大家族。Snail家族成员包括Snail 1(Snail)、Snail 2(Slug)和Snail 3(Smuc)[14]，目前研究发现，E-cadherin表达下调是EMT的最重要标志之一[15-16]。Snail通过抑制E-cadherin的转录表达，诱导ETM发生[17]。因此，Snail是参与EMT调控的重要转录因子。文献报道，乳腺癌、卵巢癌、黑色素瘤、胃癌中Snail的表达均有上调[18]，其表达水平与恶性肿瘤的转移、复发密切相关。Chen等[19]利用RT-PCR研究肝癌组织发现，在肝癌组织中Snail能通过下调E-cadherin的表达，促进肝癌细胞的侵袭。Woo等[20]利用免疫组化研究肝癌组织发现，肝癌组织中Snail的表达与肝癌的分化程度有关。免疫组化结果显示，Snail与很多恶性肿瘤的组织学分级、临床分期及淋巴结转移密切相关[21]。本组显示，Snail在HCC中的表达明显高于正常肝组织，并且与肿瘤大小、分化程度、远处转移(包括门静脉癌栓及淋巴结转移)和AJCC分期有关，与患者性别、年龄、肿瘤发生部位等无明显关系，这与文献报道基本一致。

近年研究发现，多种肝脏疾病如肝纤维化、HCC等与EMT密切相关[22]。许多转录因子作用于EMT，其中Snail在EMT中有重要作用[23-24]。EMT不仅与肿瘤发生、转移密切相关，而且在慢性炎症及纤维化疾病中也有非常重要的作用。HCC患者大多经过了慢性肝炎、肝硬化、肝癌的转变过程，非可控性炎性反应能够诱导肝癌发生、发展[25]。NF-κB是从B细胞中提取的核蛋白因子，它能与免疫球蛋白κ链基因特异性结合并促进κ轻链表达[26]。NF-κB通常与其抑制蛋白IκBα形成复合物，以非活性形式存在于细胞质中。NF-κB炎症信号通路与EMT的发展紧密相关，NF-κB是联系癌症与炎症反应之间的重要纽带[27]。NF-κB在各种炎症刺激信号的作用下被激活，从而参与调控细胞增殖、凋亡、转移等相关蛋白的表达，使肿瘤细胞增殖活性提高，抑制肿瘤细胞凋亡，促进肿瘤细胞转移[28]。李亚平等[29]研究发现NF-κB在胃癌细胞和组织中高表达，与胃癌的发生、发展、浸润和转移密切相关。文献报道[25]，NF-κB的异常表达与肝癌的进展密切相关。肝炎病毒诱导HCC发生的小鼠模型中，在肝炎导致肝癌的后期NF-κB失活能够抑制肿瘤细胞增殖与迁移，阻断肿瘤发展进程以及肝细胞的恶性转化，使瘤体消退[30]。临床研究发现，NF-κB在HCC中的表达与肿瘤大小、病理分级等相关，提示在HCC的进展过程中，NF-κB表达程度可考虑作为HCC恶性程度评价指标之一。本实验也发现，NF-κB在HCC中高表达，且与肿瘤大小、分化程度、远处转移、临床分期有关，与文献报道基本一致。

另外，本实验结果发现Snail和NF-κB在由肝炎导致的HCC中表达呈正相关，这两个因子均参与EMT的发生、发展，两者之间究竟通过何种途径相互影响，尚需进一步研究。同时，有研究表明，靶向NF-κB信号途径在肝癌的治疗和预防中有积极的作用[31]。通过应用NF-κB抑制剂，不仅能够有效抑制肝炎、肝硬化患者肝细胞内的NF-κB活性，而且可能会影响Snail蛋白的表达和肝细胞EMT进程，这在肝炎向肝癌发展过程中具有重要意义。相信随着对NF-κB生物学功能的进一步深入，针对NF-κB的抑制剂在临床上将会有广阔的应用前景，为肝炎、肝硬化及HCC患者的治疗提供新的思路。

人有些愕然，心想：是谁在说话？他四下张望，没有人。再瞪大了眼睛，仔细寻找，还是没找到。于是他找来了显微镜，终于看清楚了。原来是酵母菌！他非常吃惊：酵母菌也会说话！

[1] Bruix J, Gores G J, Mazzaferro V. Hepatocellular carcinoma: clinical frontiers and perspectives[J]. Gut, 2014,63(5):844-855.

在语言交际中，同样会出现语言之间的结构相互适应与选择，其属于语言顺应论范畴。语言使用是语言发挥功能作用的过程，语言使用者需根据不同语言环境来选择语言交际手段，以达到预期交际意图。翻译同语言交际一样，也是一个文化选择的过程。选择源语材料之后，译者就需要分析文本，找准文化立场，选择恰当的翻译方法，运用合适的翻译策略。在翻译过程中，这种选择与顺应的过程是一种动态的顺应，这与权变思想已然相通。经权相济是一种辩证、灵活的思维模式，也是一种有效的调节机制。

[3] 吴 迪, 苏 琪, 殷红专, 等. 上皮特异性抗原和CD-(44)蛋白在原发性结直肠癌组织中的表达及临床意义[J]. 医学综述, 2016,22(21):4332-4334,4338.

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[5] 杜 姗, 耿敬姝. NF1与Twist在胃组织中的表达及其与临床病理相关性的研究[J]. 肿瘤学杂志, 2015,21(5):396-400.

空间自相关是指在具有差异性的空间区位商的地理现象，它们的某个特征值存在统计关联性，空间自相关可分为全局空间自相关和局域空间自相关[8]。基于Geoda软件计算出沈阳448个小区房价的莫兰指数I，通过莫兰指数I来判断不同空间区位的小区房价在空间方面是否具有空间关联性。

1.4 统计学处理 采用SPSS 20.0软件进行统计学处理，计数资料用χ2检验，等级分组资料用Spearman等级相关分析，P<0.05为差异具有统计学意义。

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1.3 结果判断 Snail主要定位于癌细胞的胞质，细胞核可有少量表达，NF-κB主要定位于癌细胞的胞核，胞质内可有少量表达。参照Ishida的计数标准[3]：组织芯片上每个点在40倍镜下寻找10个视野，每个视野在癌细胞丰富区域计数100个癌细胞(不够10个视野的位点每个视野计数200个癌细胞)，分别统计Snail和NF-κB表达的癌细胞数并计算其百分比。采用半定量积分法判断结果[4]，按阳性细胞数判断：<5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分；按阳性强度判断：淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；两积分相乘，0分为阴性(-)，1～4分为弱阳性(+)，5～8分为阳性()，9～12分为强阳性()。染色结果均由两位高资历病理医师采用双盲法评估。

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社会信用环境欠佳，影响了小额农贷推广。受社会信用大环境的影响，一些农户信用观念淡薄，想方设法逃废银行的债务。地方政府、司法部门对维护金融债权、建立社会信用、打击恶意逃废债务行为的力度不够，导致银行不同程度地产生了“慎贷、恐贷”的心理，在一定程度上抑制了农户小额信用贷款的推广。

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6.关于组织实施教学的要求：A按进度分解B据要点展开C以对象施教，组织实施教学的原则：把握框架结构——整体性；紧扣重点难点——针对性；讲深讲透——彻底性，没有理论的彻底性，就没有有效性，理论彻底，才能征服人，才能展现理论魅力；理论观照现实——现实性，只有理论联系实际，才能体现理论的生命力。

5.1 信息公开透明的特殊要求。在食品安全信息公示栏中还应公示营业执照。在“明厨亮灶”的电子显示屏、网站或APP上公示食品安全追溯、废弃油脂收运等信息。鼓励将餐厅重点区域的食品加工操作过程视频信息和其他食品安全信息与辖区监管部门联通，供监管部门实施远程监管。

在家长有了对亲子绘乐课堂的初步了解，掌握了基本的技能技巧之后，还需要激发家长主动开展的意识和兴趣。因此，每次活动之前，我们可以先组织一些热心家长对活动的主题、内容进行讨论，征求意见，教师提供建议，引导家长开始准备工作。在活动中，家长们各显神通、各司其职，有的担任主持，有的制作学具，有的负责采购……发挥自己的特长，从而让绘乐课堂焕发生命的活力。

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目前锂电池的充电方法很多[7-10],如传统的恒流恒压充电方法、传统的三段式充电法、以及传统的五阶恒流充电方法等,但这些方法具有充电速度慢、充电效率低以及极化现象导致温升过高等缺点[11-13]。

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由图1可知，位于面层和基层间的测点1的竖向应力及应变水平较高，随着结构厚度增加，测点2及测点3的应力和应变水平降低，降低趋势呈现近似直线，说明超厚宽幅水泥稳定碎石基层各结构层间的黏结力较强，结构整体性较好。

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