神经胶质瘤是最常见和具有侵袭性的脑肿瘤，约占所有脑和中枢神经系统肿瘤的30%[1]。目前，胶质瘤主要采用手术治疗，随后采用放射治疗和替莫唑胺化疗。神经胶质瘤的预后与世界卫生组织(WHO)分级相关，WHO Ⅱ级胶质瘤患者的中位生存期为5～10年，Ⅲ级胶质瘤的中位生存期为3～5年[2]。因此，发现新的生物标志物有利于神经胶质瘤的诊断及预后评估。微小RNA(miRNA)通过结合基因3′-UTR调节转录后水平的基因表达，从而影响细胞增殖、凋亡、分化和癌症转移和侵袭[3]。许多研究已经证明miRNA失调可能作为诊断和预后标记[4-5]。在神经胶质瘤中，miR-520b[6]、miR-202[7]、miR-592[8]和miR-373[9]等血浆或血清miRNA可作为诊断和预后的生物标志物。

所以，卡内基的捐赠活动，一方面直接支持了我国图书馆事业的发展，为我国培养了图书馆学专业人才，卡内基基金会捐给中国的书刊都非常具有研究价值和收藏价值，成为我国近代图书馆藏书的重要组成部分。另一方面，极大地推动了我国社会力量积极参与图书馆建设，激发了社会各界对于图书馆事业的捐赠热情，为当时社会力量参与图书馆建设的方式提供了借鉴。当然，由于当时中国缺少产生卡内基式大实业家的社会和时代环境，不会出现卡内基那种大规模、持续的图书馆捐赠活动，当时社会各界对图书馆事业的捐助仅局限于对一、两个馆的经费支持或图书捐赠，而且这种捐赠多是一次性的。

夜雨观澜：欧元区11月制造业P MI表明，欧洲制造业扩张速度放缓，欧洲经济整体增速已经过了繁荣顶点而有所下行。主要原因或因为原材料的上涨导致制造业成本上升。且美国对欧盟加征关税的负面影响已开始显现。目前，整体欧元区景气度下行。预计未来推出的购债计划对经济的刺激作用整体有限，欧元指数面临下行压力。美国I S M制造业指数大幅高于预期，显示美国经济活动持续扩张。预计2019年美国加息至多3次，美国经济2019年上半年仍能保持较好的增长势头。

以往研究表明miR-655在肿瘤中低表达，能够作为肿瘤的诊断基因及治疗靶点[10-11]。但是miR-655在神经胶质瘤中的作用还不明确。本研究通过分析miR-655在神经胶质瘤中的表达及其与临床特征的相关性，探讨了miR-655在神经胶质瘤中的诊断和预后作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2013年1月至2017年5月在内蒙古医科大学附属医院进行手术治疗的97例胶质瘤患者的组织和癌旁组织。所有患者手术后进行随访，随访时间为3～40个月。所有参与者都签署知情同意书，本研究经过内蒙古医科大学附属医院伦理委员会批准。所有患者在接受手术获取标本前未接受过放疗或化疗等治疗，并且具有完整的临床资料。所有诊断均由2名病理科医师确认。将收集的组织样本进行-80 ℃冷冻处理，然后提取总RNA进行miRNA检测。

本文回溯了西汉“时禁”灾祥观的历史渊源，其核心内容在于王者“顺时施政”，就会带来祥瑞。在天、地、人三道和谐统一的基础上，实现“合德”，避免灾异发生。

1.2 方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)进行检测。收集神经胶质瘤组织以及癌旁组织样品，称量50 mg进行液氮研磨，加入1 mL Trizol(美国Invitrogen)提取液按照试剂说明书操作步骤提取组织总RNA。将提取的总RNA采用超微量分光光度计(美国Thermo Fisher)检测总RNA的浓度和纯度。然后取1 μg总RNA采用miRcute miRNA cDNA第一链合成试剂盒(北京天根生化科技)进行miRNA逆转录，操作步骤按照试剂盒说明书进行。qPCR采用SYBR Green法检测。反应体系以及扩增条件按照miRcute增强型miRNA荧光定量检测试剂盒(北京天根生化科技)检测说明书进行操作。检测引物由苏州金维智合成。miR-655上游引物为5′-TCC GAA TAA TAC ATG GTT AA-3′，下游引物由试剂盒提供；U6上游引物为5′-TCC GAT CGT GAA GCG TTC-3′，下游引物为5′-GTG CAG GGT CCG AGG T-3′。反应体系为：cDNA 5.0 μL；上游引物0.5 μL；下游引物0.5 μL；2×miRcute Plus miRNA Premix 10 μL，ddH2O 4.0 μL，总体积为20 μL。miR-655采用ABI 7500荧光定量PCR仪(美国Applied Biosystems)检测。qPCR扩增条件为：94 ℃预变性15 min，然后94 ℃ 20 s、60 ℃ 34 s进行40个循环。以U6表达为内参，相对表达水平采用2-ΔΔCt进行计算。每个样品重复3次。

2.3 miR-655在诊断中的作用 ROC曲线分析miR-655对神经胶质瘤患者的诊断意义，结果见图1。结果表明miR-655表达诊断神经胶质瘤AUC为0.959(95%CI：0.936～0.982)，根据约登指数确定最佳临界值为0.755，其敏感度和特异度分别为89.7%(87/97)和88.7%(86/97)。

2 结 果

2.1 miR-655在神经胶质瘤中的表达显著降低 神经胶质瘤组织和癌旁组织中miR-655的表达采用qRT-PCR检测。结果表明神经胶质瘤旁组织和癌组织中miR-655的相对表达分别为1.79±0.908和0.47±0.262，差异具有统计学意义(t=13.11，P<0.001)，miR-655在神经胶质瘤组织中的表达显著降低。

2.4 miR-655在预后中的作用 采用COX回归进行单变量和多变量分析用于评估miR-655表达和各种临床病理参数对患者预后的影响，结果如表2所示。该结果表明miR-655表达(P=0.008)和切除程度(P=0.004)是独立危险因素，用于指示胶质瘤的预后不良。根据miR-655的表达中位值0.426分为两组(<0.426组和≥0.426组)，Kaplan-Meier分析miR-655<0.426组和miR-655≥0.426组的生存时间，结果见图2。该结果表明miR-655<0.426组和miR-655≥0.426组神经胶质瘤患者的生存时间差异有统计学意义(χ2=8.011，P=0.004)，miR-655的表达越低说明神经胶质瘤患者的预后越差。

 

表1 miR-655表达和神经胶质瘤患者临床特征的相关性

  

临床特征nmiR-655的表达低表达组(n=48)高表达组(n=49)tP性别0.5010.479 男472522 女502327年龄(岁)1.2520.263 ≥50582632 <50392217肿瘤大小5.0600.024 <5 cm623626 ≥5 cm351223WHO分级9.3380.002

 

续表1 miR-655表达和神经胶质瘤患者临床特征的相关性

  

临床特征nmiR-655的表达低表达组(n=48)高表达组(n=49)tP Ⅰ+Ⅱ603723 Ⅲ+Ⅳ371126肿瘤切除程度0.2500.617 根治切除532528 姑息切除442321

1.3 统计学处理 数据统计分析用SPSS19.0进行。通过独立的t检验确定miR-655水平的差异。通过χ2检验确定miR-655表达与神经胶质瘤临床病理特征的相关性的意义。诊断界限值及曲线下面积(AUC)采用ROC进行分析，以评估miR-655在神经胶质瘤中的诊断价值。存活率差异采用Kaplan-Meier分析。使用Cox多变量分析进行预后危险因素分析。双侧P<0.05被认为差异具有统计学意义。

2.2 miR-655和宫颈癌临床数据的相关性 神经胶质瘤患者的临床特征与miR-655表达的相关性如表1所示。根据miR-655的中位值(0.426)分为两组：低表达组(<0.426)48例和高表达组(≥0.426)49例。研究结果表明miR-655表达与性别、年龄、手术切除方式无相关性(P>0.05)。然而，miR-655的表达与肿瘤大小和WHO分级显著相关(P<0.05)。

  

图1 ROC曲线分析miR-655对神经胶质瘤患者的诊断意义

 

表2 COX回归进行单变量和多变量分析临床病理参数对神经胶质瘤患者预后的影响

  

参数单因素分析危险比95% CIP多因素分析危险比95% CIP性别0.8650.432～1.8990.8640.6610.310～1.2010.156年龄1.1120.995～1.2130.3571.0110.936～1.1320.293肿瘤大小1.0280.953～1.3160.0690.9010.713～1.1120.267WHO分级2.9031.268～4.8130.0010.6180.214～1.8650.412切除程度0.2510.110～0.5730.0020.2960.103～0.5680.008miR-655表达0.0310.050～0.199<0.0010.0060.000～0.1090.004

  

图2 Kaplan-Meier分析miR-655<0.426组和miR-655≥0.426组的生存时间

3 讨 论

神经胶质瘤是中枢神经系统中最常见的肿瘤。目前对神经胶质瘤的主要诊断方法是计算机断层扫描和核磁共振成像，该诊断价格昂贵所以阻碍其作为常规诊断筛选工具的广泛应用。因此，发展快速和有效的筛选工具有利于神经胶质瘤诊断及预后预测。

miRNA在肿瘤发展中发挥重要作用，可能作为神经胶质瘤的潜在诊断和/或预后生物标志物。以往研究表明miR-655在食管鳞癌、肝癌、三阴性乳腺癌及垂体瘤中的表达显著降低[11-14]，和本研究结果相同。本研究结果表明miR-655在神经胶质瘤中的表达显著降低，而且miR-655的表达和肿瘤大小、WHO分级密切相关，COX回归分析表明miR-655的表达和肿瘤切除程度是神经胶质瘤的独立危险因素；ROC分析表明miR-655表达诊断神经胶质瘤的AUC为0.959(95%CI：0.936～0.982)，当miR-655表达为0.755时其诊断的敏感度和特异度分别为89.7%(87/97)和88.7%(86/97)。Kaplan-Meier分析神经胶质瘤的表达<0.426组和≥0.426组生存时间差异有统计学意义(χ2=5.011，P=0.018)，miR-655的表达越低说明神经胶质瘤患者的预后越差。以上结果和以往研究类似。在三阴性乳腺癌中miR-655的表达和淋巴结转移相关，过表达miR-655能够通过抑制Prrx1的表达抑制EMT，从而抑制三阴性乳腺癌细胞的迁移和侵袭[14]。在食管鳞状细胞癌中miR-655与食管鳞状细胞癌的淋巴结转移及预后不良相关，过表达能够抑制ZEB1的表达，能够促进EMT过程，促进肿瘤的迁移和侵袭[15]。在肝癌中miR-655-3p的表达与阳性微血管浸润、晚期肿瘤分期和淋巴结转移呈负相关，是肝癌的独立危险因素，可能作为潜在的预后不良的生物标志物[11]。也有研究表明miR-655的低表达与肝癌的肿瘤大小、TNM分期和转移状态呈负相关[16]。以上研究表明miR-655可以作为肿瘤的预后预测标志物，是影响肿瘤患者生存的独立危险因素。以往研究还表明过表达miR-655通过抑制PTTG1抑制食管鳞癌和垂体瘤细胞的迁移和侵袭 [12-13]。前期研究表明Securin(PTTG1编码的蛋白)在神经胶质瘤中过表达且能够促进神经胶质瘤细胞的迁移和侵袭[17]，而本研究表明miR-655在神经胶质瘤中低表达且能够影响神经胶质瘤患者的预后，表明miR-655可能通过靶向调控PTTG1从而影响神经胶质瘤的发展。

生：（B组1）：我不喜欢这篇文章。我觉得课文后面倒数第三段“我看得目瞪口呆，所有的猎人都看得目瞪口呆，连狗也惊讶地张大嘴，长长的舌头拖出嘴外，停止了吠叫”，描写不真实。

总之，本研究表明miR-655在神经胶质瘤中的表达降低，且其表达水平与肿瘤大小、WHO分级密切相关，能够作为诊断和预后不良预测的标志物。

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