每年中国乳腺癌新发数量和死亡数量分别约占全世界的12.2%和9.6%[1]。由于延误诊断，致使晚期乳腺癌患者增多。我国医疗资源不足，民众缺乏乳腺癌的知识，也导致了我国乳腺癌生存率不高[2]。根据中国国家肿瘤登记中心的数据，乳腺癌是城市女性最常见的癌症，是农村女性第四大常见癌症。只有通过更好、更便捷的方法，对乳腺癌进行早期诊断、早期治疗才能提高生存率，提高生活质量。

在唐晓龙看来，沃尔沃品牌除了拥有十足的北欧魅力之外，更重要的是作为两个孩子的父亲，他也能和自己的沃尔沃产生有关责任的共鸣。如同重要的家庭责任一样，从曾经发明推广众多安全技术到如今全系车型引入City Safety城市安全系统，沃尔沃也在91年的品牌发展历程中笃行着有关安全与质量的责任。这也是抛开自己喜好的设计之外，唐晓龙对沃尔沃心生敬意的地方。在汽车工业极力寻求发展与突破的今天，沃尔沃恪守着自己关于质量与安全的承诺，无论是对于出厂近20年的V70还是全新S90来说，它们都是各自时代质量与安全的佼佼者。

AL-HAJJ等[3]通过对人类乳腺癌原发灶和转移灶的分析，率先分离纯化出乳腺癌干细胞(BRCa-IC)。这种干细胞只占肿瘤细胞的2%左右，以CD44+CD24-/low为特异性表面标志物。它们对化疗或放疗具有抵抗性，并可再次形成肿瘤，因而可能是肿瘤复发的根源。近年研究表明，CD44基因多态性与肺癌、膀胱移行上皮细胞癌等多种肿瘤的发生、发展密切相关[4-5]。在针对乳腺癌的研究中，WRIGHT等[6]的研究指出乳腺癌组织中的CD44具有肿瘤干细胞的特质，而JIANG等[7]的研究显示，CD44 rs13347C>T基因多态性可能会通过增加CD44的表达而影响乳腺癌的发展和预后。

利用CaO与CO2反应吸附脱除CO2以及CaCO3分解为CaO与CO2的钙循环过程，不仅普遍适用于烟气脱碳（如燃烧后钙基循环脱碳[3]），还可用于化学化工过程（如乙酸重整反应吸附强化制氢[4-5]）。CaO不仅具有较高的CO2摩尔吸附容量（理论上为0.786 g CO2/gCaO），而且广泛存在于天然石灰石中，其脱碳成本较低，具有极大的经济优势[6]。因此充分了解CaO基CO2吸附剂的吸附与释放机理，对提高CO2吸附剂重复循环使用，降低钙循环脱碳技术成本，具有重要的科研价值与实际意义[7]。

本文对CD44基因的4个位点rs13347、rs11607862、rs7116432、rs8193多态性进行分析，探讨其与乳腺癌易感性的关系。

1 资料与方法

除此之外，他还在产品上寻求创新，寻求差异化发展。为了使自己在市场博弈中更加稳健，2011年他成立了冀州佳禾化肥有限公司，正式进入生产领域。

1.3.3 CD44基因分型 采用2%琼脂糖进行电泳，电泳完成后切胶纯化，对纯化后产物进行测序，图1为rs13347 C>T突变。

计算相对风险度的比值比(OR)及95%可信区间(95% CI)，见表1。以肿瘤分期为依据将患者分为2组，分别进行基因型分布的比较，一组以浸润程度将T1+T2期患者人数与T3+T4期进行比较，另一组按淋巴结是否转移将N0期患者人数与N1～3期进行比较，结果见表2。经统计比较， rs11607862、rs13347、rs7116432、rs8193等4个位点的基因多态性在乳腺癌人群和健康人群中未观察到显著差异。分别比较不同肿瘤大小、不同淋巴转移情况下患者的基因型分布情况，可以看到rs13347位点的TT基因型患者淋巴结转移量比CT/CC基因型患者淋巴转移量小，且差异具有统计学意义(P<0.05)，而携带C基因的患者远处转移人数较携带G基因患者多，但由于观察总人数过少，未进行统计学分析。其余3个位点差异无统计学意义(P>0.05)。

6.环境保护政策对养猪业发展的压力持续增加。随着畜牧业规模化、集约化程度的提高，饲养及加工过程中产生的大量排泄物和废弃物对人类、其它生物以及畜禽自身生活环境的污染愈来愈突出，已成为一个不可忽视的污染源。由于养殖数量增多、粪污处理相对滞后，农村养殖业特别是养猪业粪尿处理已成为主要的污染源，对养殖业发展非常不利。

1.3.2 多重PCR扩增 RNA 3′-UTR端与转录后基因表达关系密切，因此通过参考文献[7]及HaploView筛选出位于该区域的4个TagSNP(rs13347、rs11607862、rs7116432、rs8193)进行分析。PCR扩增时通过对产物的2轮稀释作为下一轮模板，进行三重PCR扩增，得到较纯产物。

1.2 仪器与试剂 聚合酶链反应(PCR)扩增仪(PERKIN ELMER Gene Amp PCR System 9600,USA);高速台式离心机(HERMLE Z230MR,Germany);垂直电泳仪(DYY-Ⅲ 28A，北京)；Taq Ⅰ限制性内切酶(宝生物工程大连有限公司);Ion Torrent 测序仪(Thermo Fisher Scientific公司，美国)。

1.1 一般资料 本研究人群选取2013-2015年在乐山市人民医院住院的乳腺癌患者265例(病例组)及2015年6-9月该院健康女性体检者290例(对照组)。病例组纳入及排除标准：(1)女性；(2)经病理确诊为乳腺浸润性导管癌；(3)确诊乳腺癌时无其他部位原发性肿瘤；(4)无骨髓移植史。对照组均为健康体检女性，且排除有家族乳腺癌史。病例组平均年龄(51.89±10.05)岁，对照组平均年龄(42.19±11.95)岁，差异无统计学意义(P>0.05)。

1.4 统计学处理 采用Handy-Weinberg平衡分析评估对照组基因型频率分布状况。数据采用SPSS13.0处理，计数资料比较采用χ2检验，比较病例组与对照组基因型分布差异，以P<0.05为差异有统计学意义。

  

图1 二代测序图(rs13347 C>T)

2 结 果

1.3 方法

1.3.1 基因组DNA制备 使用试剂盒制备浓度15～25 ng/μL,A260/A280比值为1.5～1.8的基因组DNA。

 

表1 CD44基因型频率分布

  

SNP位点基因型对照组人数(n)占比(%)病例组人数(n)占比(%)OR(95%CI)Prs11607862CC9934.108934.101.00(参考值)-CT14449.7012347.100.95(0.654～1.381)0.789TT4716.204918.801.16(0.709～1.897)0.555rs13347CC13145.3011142.901.00(参考值)-CT13245.7011644.801.037(0.727～1.479)0.841TT269.003212.401.453(0.817～2.584)0.203rs7116432AA93.20135.301.00(参考值)-AG8229.007329.800.616(0.249～1.526)0.292GG19267.8015964.900.573(0.239～1.376)0.208

 

续表1 CD44基因型频率分布

  

SNP位点基因型对照组人数(n)占比(%)病例组人数(n)占比(%)OR(95%CI)Prs8193CC8328.608130.701.00(参考值)-CT14851.0012447.000.859(0.582～1.266)0.441TT5920.305922.301.025(0.638～1.645)0.92

注：-表示无数据

 

表2 肿瘤分期与基因型分布(n)

  

SNP位点肿瘤分期基因型CC/AACT/AGTT/GGP基因频率C/AT/GPrs11607862T1+T2658941-219171-T3+T4102050.42640300.878N0324823-11294-N14461230.6881491070.409M1140-64-rs13347T1+T2878522-259129-T3+T4141460.58542260.423N0484312-13967-N15356160.002162880.548M1311-73-rs8193T1+T2608848-208184-T3+T4121960.53943310.424N0275224-106100-N14555300.3411451150.354M1122-46-rs7116432T1+T2959115-77289-T3+T419230.72611550.417N043264-40160-N1636740.916481840.859M1032-37-

注：-表示无数据

3 讨 论

肿瘤干细胞是在肿瘤组织中具有自我更新能力并且能够产生该肿瘤中一系列异质性肿瘤细胞的细胞，不受外界调控的恶性增殖、多向分化。在肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌和胃癌等实体瘤中均发现具有特异性的肿瘤干细胞。AL-HAJJ等[3]通过对人类乳腺癌原发灶和转移灶的分析，分离纯化出“乳腺癌干细胞(BRCa-IC)”，以CD44+CD24-/low为特异性表面标志物。CD44是黏附因子家族中的一员,是介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质间黏附作用的膜表面糖蛋白,参与细胞的增殖、分化、黏附、迁移等过程，主要参与肿瘤细胞与宿主细胞和宿主基质的黏附，而异质性黏附在肿瘤细胞侵袭性转移中起促进作用。DAVID等[9]发现CD44可溶性蛋白能显著降低各种肿瘤的恶性活动，SHIRURE等[10]也发现CD44作为功能性E-选择素配体的表达可能在乳腺癌转移中起重要作用。

2015年中国国家癌症中心发表的数据显示，我国乳腺癌的发病率在近10年来一直呈现上升趋势[8]，其中女性患乳腺癌的风险很高，在大中型城市中，乳腺癌是女性患癌风险最高的肿瘤。医疗水平越高，筛查越早，肿瘤的病死率越低，因此，筛选高特异性的肿瘤风险指标对筛查早期肿瘤意义重大。

随着研究的进一步深入，对CD44基因多态性的研究逐渐增多。基因多态性可能通过影响基因的转录、复制和修饰等改变基因的表达，从而改变其影响的分子蛋白的表达，进一步影响细胞的增殖与消亡。JIANG等[7]在对我国东南部女性研究中发现，CD44 rs13347的TT基因型在乳腺癌患者中表达比对照组高，同时，乳腺癌患者的雌激素受体阳性比例超过健康对照人群，因此认为rs13347 C>T基因多态性可能会通过增加CD44的表达而影响乳腺癌的发展和预后。而在本研究中，笔者比较了健康人群和乳腺癌人群的CD44基因多态性，并未发现几个研究位点突变有导致患病风险的差异，说明rs13347基因突变对肿瘤的影响可能存在人群间差异，由于人群来源不同，在地域环境及饮食等多因素长期影响下，从而导致了基因突变的差异。从样本量来说，也可能是本研究样本量偏少，此次抽样不足以代表总体样本特征。

乳腺癌淋巴结转移受多种因素影响，包括肿瘤大小、内分泌治疗或化疗效果[11]。段序梅等[12]发现，CD44作为一类跨膜糖蛋白，其分子变异体与癌细胞的浸润、转移密切相关。近年有研究提出，CD44在已发生肝转移患者与未发生肝转移患者两组间的表达差异具有统计学意义[13]。而本研究中，具有rs13347位点的TT基因型的患者，发生肿瘤淋巴结转移的人数明显少于CT/CC基因型患者，说明该突变在肿瘤的转移或复发上起作用。因此认为该基因位点与乳腺癌发病风险相关性不高，而是主要参与肿瘤的增殖与转移。与此类似，何彦丽等[14]研究发现CD44表达与乳腺癌淋巴结转移及预后有关，刘朝荣等[15]通过免疫组化/实时定量法研究发现Survivin及CD44基因表达随着乳腺癌严重程度增高逐渐增强，可能与乳腺癌的侵袭和转移密切相关。在对CD44其他基因位点的研究中，也有类似发现，WENG等[5]发现CD44 SNPs与膀胱移行上皮细胞癌的发生相关，rs187115基因上携带至少1个G等位基因的患者比携带野生型等位基因者有更高的患癌风险，晚期患者如有该突变，可能比其他患者更易对化疗药物耐药，或可能导致晚期患者预后较差。周鑫等[16]在对重庆地区女性研究中发现，CD44基因rs4756195位点多态性与该地区汉族女性乳腺癌的发病风险相关，AG和GG基因型是重庆地区汉族女性乳腺癌的易感基因型，此位点多态性与乳腺癌腋窝淋巴结转移、CD44表达相关，提示携带GG基因型的乳腺癌患者可能预后不良。因此，接下来笔者拟考虑增加样本量，并进行相同位点的miRNA 功能分析。

综上所述，CD44基因多态性与乳腺癌的转移、预后具有一定的相关性，但其在参与肿瘤的发生中的作用机制仍需进一步的研究探讨。

本研究选取65名被试参加了自测步速阅读实验，共三组，其中包括40名中国英语学习者(组1:高中学生，年龄16～18岁;组2:英语专业大四或研一学生，年龄22～23岁)和25名英语母语者(组3:年龄18～22岁)。中国英语学习者均来自山东省某中学以及某大学在读学生;英语母语者均为英国大学的在读学生。

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