皮瓣移植术是整形外科最常见的组织器官修复重建方法，常规应用修复治疗创伤后如关节、肌腱、大血管、神经等裸露的创面及鼻、耳再造等。然而，由于皮瓣形成早期从供区到创面，皮瓣原有的血液供应稳定状态失衡，从而触发缺血/再灌注损伤[1](ischemia/reperfusion injury ，I/R)，I/R是造成皮瓣部分，甚至全部坏死的主要原因，皮瓣成活与否是治疗效果优差和手术成败的关键，因此如何有效地减轻I/R是临床面临的一个重要问题，一些治疗措施不断被提出如缺血预处理[2]、氧自由基清除、抑制炎症反应[3]、抗细胞凋亡、改善微循环等。地奥司明(Diosmin)为黄酮类药物，可减轻组织水肿及微循环瘀滞，常用于静脉、淋巴功能不全及痔疮的治疗[4-5] ，同时地奥司明在抑制炎症反应、抗氧化应激反应方面也有良好的活性[6]。本实验采用以腹壁浅血管(SIEA)为蒂的大鼠岛状皮瓣缺血再灌注模型[7]，探讨地奥司明对皮瓣I/R的保护作用。

来一场说走就走的旅行，不是任性，而是实属无奈。原本手头上的事情太多，十一长假也准备好好“奋斗”一番，谁想一通电话的相约，孩子欢呼雀跃吵着要走，如一枚石子骤然敲破平镜的湖面。计划乱了，但心之所动，已飘向了旅途的远方。

1 材料与方法

1.1 实验动物与试剂仪器 选用雄性健康Wistar 大鼠共36只，体质量301～350 g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。地奥司明(南京正大天晴制药有限公司)；谷胱甘肽过氧化物酶测试盒、髓过氧化物酶测试盒、总抗氧化能力测试盒、脂质过氧化物含量测试盒均购自于南京建成科技有限公司。ST-16R高速冷冻离心机、ELX800微孔板分光光度计(Thermo公司， 美国)，Nanodrop2000酶标仪(BioTek公司，美国)。

1.2 实验方法

1.2.1 实验分组、模型制备及取材 将36只大鼠随机分为3组：假手术组(A组)、I/R组(B组)、地奥司明-I/R组(C组)，每组12只，予以腹腔注射10%水合氯醛溶液按0.03 mL/kg剂量进行大鼠全身麻醉后使其仰卧并固定，左腹部脱毛，按照Petry JJ和Wortham KA 对SIEA皮瓣的解剖[7]，设计以SIEA为蒂长6.0 cm×3.0 cm的岛状皮瓣，规范无菌操作，制作皮瓣，解剖股动脉鞘，B组、C组进行缺血处理，结扎股动、静脉及分支远端，用血管夹夹闭大鼠岛状皮瓣的供应血管即股动、静脉近端10 h后取出血管夹再通，恢复皮瓣动、静脉血流，建立皮瓣I/R模型。A组不做缺血处理，仅原位缝合。术前2 h C组用地奥司明和生理盐水配制成的50 mg/mL混悬液以150 mg/kg的剂量进行灌胃，A组、B组以地奥司明等体积生理盐水同频率灌胃，术后各组大鼠每隔12 h，连续灌胃4 d。A组皮瓣形成34 h后，B组及C组缺血10 h，再灌注24 h后，各组随机选取6只大鼠处死后取材，分别在皮瓣中段边缘切取约1.5 cm×2.0 cm全层皮瓣组织，洗净表面血液后沾干，裁取0.5 cm×0.5 cm放入10%的甲醛液中固定，剩余皮瓣组织立即置于-80 ℃冰箱冷冻保存。各组剩余6只大鼠用于计算皮瓣成活率。

1.2.2 皮瓣组织HE染色 各组取0.5 cm×0.5 cm皮瓣组织放入10%的甲醛液中固定24 h，脱水透明石蜡包埋切片后HE染色，观察光镜下组织学变化。

目前认为I/R的机制有以下几个方面：活性氧损伤、炎症反应、钙超载、能量代谢障碍、细胞凋亡、血液循环障碍等。地奥司明为源于参属植物(Scrophularia nodosa)的一种纯化、微粒化的黄酮类化合物类药物，其具有广药理活性和低毒性的特点，作用于静脉及微循环治疗静脉、淋巴功能不全和急慢性痔疮等疾病[4-5]。研究发现，地奥司明也具有抗炎症反应、抗氧化应激反应的作用[6]。地奥司明对脑及肾缺血再灌注损伤的保护作用已有研究证实，但对皮瓣I/R的保护作用的报道很少。

在建立相关监督机制时，应当根据工会的发展详情制定合理健全的内控制度、完善奖励机制、系统的考核机制等，进而保证工会会计合理、科学发展。对工会的各部门，每位员工都要进行及时的考核、绩效评估等，采用适当的奖励措施激励员工努力工作，提升员工的财务风险防范意识。

1.2.4 计算术后1周皮瓣成活率 术后第7天观察各组大鼠皮瓣颜色、质地，Image-Pro-Plus 6.0软件测定皮瓣成活面积，计算皮瓣成活率。

2.2 LPO含量、GSH-PX活性、T-AOC、MPO活性 A组MPO活性和LPO含量均低于B组、C组，A组GSH-PX活性和T-AOC均高于B组、C组；B组MPO活性和LPO含量均高于C组，C组GSH-PX活性和T-AOC均高于B组。比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2 结 果

皮瓣I/R过程中产生大量氧自由基，造成血管内皮细胞损伤[8]，中性粒细胞黏附、激活，细胞膜膜磷脂降解，释放大量的趋化因子、炎性介质，继而中性粒细胞发生浸润和呼吸爆发[9]，造成血管和组织进一步损伤。血管内皮屏障功能损伤及细胞外基质脂质过氧化损伤，血管壁的通透性发生变化，大量血浆外渗，组织间隙液体增多，毛细血管静脉端受到压迫，导致其管腔变窄，发生微循环障碍[10]。动、静脉的闭塞均可损伤皮瓣，而静脉血栓闭塞较为多见，皮瓣的静脉回流与动脉供应同样重要，因为当静脉回流不良时，皮瓣组织会发生严重肿胀并且压迫其供应的动脉致其闭塞，使皮瓣血运不良，发生部分、甚至全部坏死。氧自由基损伤和炎症反应是皮瓣I/R发生的重要原因。

 

注：中性粒细胞如黑色箭头所示；坏死细胞碎片如红色箭头所示

图1 各组大鼠皮瓣HE染色

1.3 统计学方法 采用SPSS18.0统计分析软件，计量资料以表示，各组组间的比较采用单因素方差分析法，LSD法或SNK法即q检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

[70][72][75]The State of Food and Agriculture 1954, Food and Agriculture Organization of The United Nations, Rome, 1954, p.85, 9, 27.

 

表1 各组大鼠皮瓣LPO含量、GSH-PX活性、T-AOC、MPO活性

  

项目LPO/(μmol/gprot)GSH-PX/活力单位T-AOC/(mmol/gprot)MPO/(U/克组织湿重)术后7d皮瓣/成活率%A组1.53±0.09223.23±5.910.29±0.011.11±0.0798.28±1.52B组5.30±0.20*131.43±6.73*0.13±0.01*1.69±0.09*30.98±4.80*C组4.27±0.22#△159.46±7.10#△0.23±0.02#△1.39±0.11#△72.75±2.14#△q值26.25*24.10*38.08*11.97*65.99*36.04#16.75#12.95#5.95#25.03#9.80△7.35△25.13△6.02△40.96△

注：B组与A组相比，*P<0.05；C组与A组相比，#P<0.05；C组与B组相比，△P<0.05。

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2.3 术后1周大鼠皮瓣成活率 术后1周A组皮瓣颜色红润，质地软，成活良好；B组皮瓣大部分坏死，色黑，质地较硬，无毛细血管反应；C组皮瓣部分回缩，部分坏死，成活面积明显大于B组。A组皮瓣成活率显著高于B组、C组，C组显著高于B组，比较差异有统计学意义(P<0.05) 。

3 讨 论

1.2.3 皮瓣组织GSH-PX活性、LPO含量、MPO活性及T-AOC检测 各组取剩余皮瓣组织按各试剂盒公司说明分别测定各组GSH-PX活性、LPO含量、MPO活性及T-AOC。

2.1 各组大鼠皮瓣HE染色 A组真皮层中肌层肌纤维少量坏死溶解，结缔组织中可见散在坏死细胞碎片(图1A)；B组真皮层结缔组织局部坏死，并伴有大量中性粒细胞浸润，胶原纤维排列紊乱(图1B)；C组真皮层各层结构排列稍紊乱，局部肌纤维周围可见中性粒细胞浸润(图1C)。

MPO是显示中性粒细胞组织浸润程度的重要指标[11]；LPO是体内不饱和脂肪酸被自由基氧化所代谢的终产物，是组织、细胞脂质过氧化作用程度的体现，皮瓣组织MPO、LPO检测结果显示，皮瓣I/R后，I/R组组织MPO及LPO水平均增高，地奥司明-I/R组在应用地奥司明后MPO及LPO水平均降低，同时HE组织学观察结果显示应用地奥司明后皮瓣组织内炎细胞的浸润轻，提示地奥司明可减轻皮瓣I/R后炎性细胞浸润和组织脂质过氧化。GSH-PX是细胞内存在的抗脂质过氧化作用的酶类之一，GSH-PX可催化分解LPO，减少LPO的生成，减轻脂质过氧化损伤，从而保护机体[12]；T-AOC反映的是体内抗氧化物对抗活性氧(ROS)损伤保护机体的能力[13]，可使内环境中ROS处于动态的平衡，从而保持机体内环境氧化还原体系的相对稳定，皮瓣组织GSH-PX、T-AOC检测结果显示，皮瓣I/R后，I/R组组织GSH-PX及T-AOC水平均降低，地奥司明-I/R组在应用地奥司明后，GSH-PX及T-AOC水平均增高，提示地奥司明可降低组织内谷胱甘肽过氧化物酶消耗，提高皮瓣组织总抗氧化能力。在随机组间对照研究中，地奥司明-I/R组皮瓣成活率与I/R组存在显著性差异，提示地奥司明对大鼠皮瓣缺血再灌注损伤具有保护作用，可显著提高缺血再灌注皮瓣的成活率。

综上所述，皮瓣I/R后给予地奥司明治疗能显著减低皮瓣炎症反应、LPO水平，降低GSH-PX损耗，增强T-AOC，从而减轻皮瓣缺血再灌注损伤，提高皮瓣成活率。

(本文图1见封三)

Seminar即研讨会，是以教师和学生为共同的教学主体，以学术交流互动为特征，以相互启发为进步动力的交流模式，通过师生研讨从而达到教学与科研的双重目的[1]。Seminar起源于18世纪的德国，随后被美、英、法等国借鉴，并逐渐成为西方发达国家高等教育的基本形式，在大学本科和研究生教育中具有非常重要的作用，是西方国家高等教育现代化的重要标志[2，3]。近年来，我国高校多将Seminar教学模式应用于硕士、博士研究生阶段的教学活动，对研究生科研能力的培养起到了巨大的推动作用，但目前该教学方式主要在课题组内部进行[4～6]。

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