偏头痛是一种常见的原发性头痛，临床上常表现为单侧或双侧搏动性头痛，可伴有认知和情绪障碍。偏头痛虽不危及生命，但其显著影响了全球约12%总人口的生活质量［1］。皮层扩散抑制（CSD）是近年来公认先兆性偏头痛的重要病理生理机制［2］。CSD指大脑皮质受到有害刺激后出现神经元和神经胶质细胞去极化，伴随着细胞外钾离子浓度的升高和多种神经递质的释放，并向周围组织异常传播，同时影响了脑干内源性镇痛系统，被认为是偏头痛产生的病理基础［3］。针刺可通过对神经递质、血管微循环的影响，抑制疼痛信号的传递和感受，显著减轻偏头痛症状，在偏头痛的防治中具有良好的疗效［4］。同时针刺治疗安全性高、经济负担小、无副作用，对于偏头痛防治具有重要意义［5］。目前针刺对于偏头痛的治疗研究缺乏深度和广度，本研究通过氯化钾溶液刺激大鼠大脑皮层建立CSD大鼠偏头痛模型，观察针刺穴位对血浆和中脑导水管周围灰质（PAG）区内降钙素基因相关肽（CGRP）、β－内啡肽（β－EP）、5－羟色胺（5－HT）、细胞原癌基因fos（c－fos）的影响，探讨针刺对偏头痛的防治机理。

1 材料与方法

1.1 实验动物 50只健康雌性成年SD大鼠，体质量220～260 g，购买并饲养于江苏大学SPF级动物实验中心，生产许可证：SCXK（苏）2013－0011。分笼饲养，自由摄食、饮水，实验前适应环境1周。

1.2 主要试剂与仪器 CGRP、β－EP、5－HT放射免疫分析试剂盒，CGRP、β－EP、5－HT、c－fos SABC 试剂盒，均购于美国sigma公司；3 mol/L氯化钾溶液、银质毫针（直径 3～5 mm、长 1.5～2.0 cm）、电针治疗仪、立体定位仪等试剂与仪器由江苏大学医学院提供。

1.3 动物分组及处理 将大鼠随机平均分为5组。空白对照组：常规饲养10 d，不予任何处理。模型对照组：常规饲养10 d后建立CSD模型，方法见“1.4”项。针刺预防组：针刺大鼠太冲、阳陵泉穴治疗10 d，建模后，不再针刺。针刺治疗组：常规饲养10 d，模型建立成功后，针刺大鼠太冲、阳陵泉穴，方法、疗程见“1.5”项。针刺防治组：建立模型前针刺大鼠太冲、阳陵泉穴，持续10 d，建模后继续针刺治疗，方法、疗程见“1.5”项。

1.4 CSD大鼠模型建立 将大鼠头部固定，在两侧顶骨各开一直径约2 mm的小孔，作为诱导CSD的窗口，保持硬脑膜完整，用棉球蘸取浓度为0.5 mol/L的氯化钾敷在小孔处，每20 min换1次，当大鼠出现频繁甩头、前爪挠头、双耳竖立发红、竖毛、胡须抖动、口鼻分泌物增加、烦躁不安等表现时，提示造模成功，行为学改变持续约2.5～3 h后活动减少。

2.2 针刺对大鼠血浆CGRP、β－EP、5－HT含量的影响见表2。

1.5 针刺方法 动物穴位定位参照《实验针灸学》［6］，银质毫针连接电针治疗仪，负极接大鼠太冲穴，正极接阳陵泉穴，频率为 20～40 Hz，电压为 2～4 V，采用静息—刺激交替模式，每次刺激时间为1 min，每次静息时间为1 min，持续20 min，疗程为3周。

1.6 大鼠血浆CGRP、β－EP、5－HT含量测定 各组大鼠在建立模型后、针刺治疗前1 h与针刺治疗后，以乙醚麻醉大鼠，内眦取血约3 ml（CGRP、β－EP、5－HT各需约1 ml）收集于乙二胺四乙酸抗凝管中。低温分离血浆后－70℃保存待测。采用放射免疫分析法对大鼠血浆CGRP、β－EP、5－HT测定，严格遵照试剂盒说明书操作。

1.8 统计学分析 应用SPSS 22.0软件进行统计学分析。所有数据均采用均数±标准差（）表示，组间比较采用单因素方差分析，组内差异采用Dun－t检验。P＜0.05为差异有显著性意义。

Q：上海印刷业近年来获得了众多国内外的印制大奖，这是否代表上海印刷的水平达到了国内乃至国际领先的水平？

1.7 大鼠脑干CGRP、β－EP、5－HT和c－fos含量测定 各组大鼠在完成针刺治疗并取血后，腹腔注射过量0.6%戊巴比妥钠麻醉处死大鼠后，暴露心脏，行主动脉插管后剪开右心耳，4%多聚甲醛灌注至四肢脊柱变硬；取脑并置于固定液中固定后，在大脑脚底作一冠状切面，剥离小脑，将脑干作冰冻连续冠状切片，切片厚30μm，隔6取1。采用SABC法进行免疫组织化学染色，CGRP 一抗浓度为 1∶2 000，β－EP 一抗浓度为1∶100，5－HT 一抗浓度为 1∶100，c－fos一抗浓度为1∶100，用PBS代替一抗行空白对照。其他步骤严格遵照试剂盒说明书操作。应用MDIAS－500型多媒体彩色图文分析系统对切片进行图像分析。选取部位限定为PAG区的相同平面，拍摄每张切片左上、右上、左下、右下和中央部5个视野图片（×40），测定每个视野CGRP、β－EP、5－HT、c－fos的阳性细胞个数，取均值进行统计分析。

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2 结果

2.3 各组 CSD 大鼠 PAG 区 CGRP、β－EP、5－HT、c－fos阳性细胞数比较 见表3。

配电网是连接电网与用电客户的关键、是电能输送的纽带，同时与上级电网、终端用户，以及新能源客户等直接相连，影响其运行状态的因素较多且复杂，重过载、低电压、三相不平衡等异常状态时有发生，治理成本高且治理效果难以得到有效保证，为配电网安全稳定运行带来潜在隐患。同时,随着人们生活品质的不断提升，用户对电能的依赖性与日俱增，2018年，国家电网公司发布行政1号文，明确了“人民电业为人民”的企业宗旨，要求电网公司聚焦供电服务热点，加强服务精益管控，有效解决服务短板，明确将加快构建“以客户为中心”的现代服务体系作为各项工作的根本出发点。

 

表1 各组大鼠干预后一般状态行为学改变情况比较 （min，）

  

注：与模型对照组比较，①P＜0.01；与针刺防治组比较，②P＜0.01

 

组 别n 频繁甩头 前爪挠头 双耳竖立发红模型对照组171.88±1.15 175.23±1.36针刺预防组 139.50±2.79①② 148.50±2.31①②针刺治疗组 148.09±2.01①② 146.71±1.42①②10 168.57±2.61 10 141.22±3.20①②10 145.65±2.81①②针刺防治组130.50±2.60① 140.92±1.56①10 132.50±1.94①

 

表2 各组大鼠针刺干预前后血浆CGRP、β－EP、5－HT含量的变化 （）

  

注：与空白对照组比较，①P＜0.05，②P＜0.01；与模型对照组比较，③P＜0.01；与同组治疗前比较，④P＜0.01；与针刺防治组治疗后比较，⑤P＜0.05，⑥P＜0.01

 

组 别空白对照组n 时间10 －CGRP（pg/ml）25.48±6.57 β－EP（pg/ml） 5－HT（ng/ml）135.51±13.85 195.62±22.64模型对照组 85.37±9.46② 128.57±15.74②10 －针刺预防组 10 － 54.01±3.52②③⑥ 114.25±10.99②③⑥ 160.01±10.63①③⑥73.13±11.25②针刺治疗组 10 治疗前 69.50±9.61② 90.39±14.30② 138.60±18.33②治疗后 44.68±4.25④⑥ 121.85±7.18④⑥ 166.34±14.91④⑤132.87±8.87④ 180.51±14.82④针刺防治组 116.26±15.12②③ 154.98±16.32①③10 治疗前51.83±7.62②③治疗后38.54±4.22④

2.1 大鼠一般行为学改变 建模前各组大鼠均存在着正常的生物学行为，模型对照组、针刺治疗组、针刺预防组、针刺防治组建模后大鼠均出现不同程度的频繁甩头（连续2次以上）、前爪挠头（连续5次以上）、双耳竖立发红、竖毛、胡须抖动、口鼻分泌物增加、烦躁不安等表现，提示CSD大鼠建模成功。针刺预防组行为学改变较模型对照组持续时间短（均P＜0.01），提示针刺对偏头痛有预防作用。给予针刺治疗后，针刺治疗组、针刺防治组行为学改变较模型对照组持续时间短（均P＜0.01），提示针刺对偏头痛有治疗作用。另外，针刺防治组行为学改变持续时间较针刺预防组和针刺治疗组短（均P＜0.01），提示针刺防治对偏头痛的效果最佳。见表1。

由2.1节可知交点轴线的变动自由度是4，依据T-Map维度与几何要素变动自由度数量的关系，可知交点轴线T-Map应是4维E4的凸体。

3 讨论

偏头痛发病机制的多种学说中，CSD能较好地解释偏头痛的发生机制，适用于评价治疗手段对于偏头痛的防治效果［7］。CSD与内源性镇痛系统有着密切联系，后者早在上世纪八十年代被阐明［8］，指脑干内存在着由PAG、中缝大核、脑桥背外侧网状结构等在功能上密切相关的结构，受到刺激后可抑制疼痛信号的传递和感受，从而达到镇痛效果。现代研究表明，内源性镇痛系统的镇痛效应与CGRP、5－HT、β－EP等多种神经递质作用关系紧密［9］。CGRP有很强的扩张血管作用，在偏头痛发病机制中起着重要作用［10］。5－HT作为重要的神经递质，其含量多少与偏头痛发生发展有着密切联系［11］。β－EP是内源性镇痛系统的重要神经递质，可通过激活阿片受体内阿片肽，抑制疼痛的传递［12］。c－fos是神经元受伤害性刺激后激活的标志物，它在脑缺血后快速表达，持续时间短，在疼痛研究中可用于识别神经元激活区域，目前被广泛应用于偏头痛发病机制和疗效研究［13］。

 

表 3 各组大鼠干预后脑 PAG 区 CGRP、β－EP、5－HT、c－fos阳性细胞数比较 （个，）

  

注：与空白对照组比较，①P＜0.01；与模型对照组比较，②P＜0.05，③P＜0.01；与针刺防治组比较，④P＜0.05，⑤P＜0.01

 

组 别n CGRP β－EP 5－HT c－fos空白对照组 4.62±1.04 6.75±2.05 10 15.25±5.7518.29±1.34模型对照组10 39.06±7.72①针刺预防组 10 32.07±6.24②⑤ 12.31±1.45③④ 3.02±0.60②④ 15.02±1.55②⑤9.42±2.58①2.10±0.89① 18.25±4.60①针刺治疗组 2.91±0.83②④ 13.60±2.74②④10 29.54±4.92③④11.79±2.27②④针刺防治组3.72±0.86③ 10.20±3.31③10 23.71±4.48②15.28±4.21③

中医作为祖国传统治疗手段，注重辨证论治，针刺作为其治疗的重要部分，其疗效与安全性都易令人接受。有多项研究表明，针刺可通过对神经系统中神经递质传递、感受的抑制，在偏头痛的防治中起着一定作用［14］。有研究表明经过针刺治疗后，偏头痛患者外周血CGRP降低，5－HT、β－EP升高，提示针刺可通过影响内源性镇痛系统中重要神经递质以缓解偏头痛症状［14］。在本研究中，建立的CSD大鼠血浆中CGRP、5－HT、β－EP 呈现了类似变化，且其脑 PAG 区相应细胞因子也发生了平行改变，进一步说明了在偏头痛CSD机制中，针刺可通过调节内源性镇痛系统抑制影响 CGRP、5－HT、β－EP、c－fos的表达，进而抑制痛觉信息的传递。在针刺预防组中，大鼠血浆CGRP较针刺治疗组降低，脑 PAG 区 5－HT、β－EP升高，表明针刺对于预防偏头痛进展起着一定作用。

本研究通过诱导CSD建立大鼠偏头痛模型，观察针刺穴位对血浆内的神经递质CGRP、β－EP、5－HT的影响，并通过对 PAG 内 CGRP、β－EP、5－HT、c－fos的研究，证实了穴位针刺可激活内源性镇痛系统，并通过提高痛觉阈值缓解偏头痛症状，进一步阐述了针灸治疗偏头痛的机制，为偏头痛的诊疗研究提供新的理论依据。

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