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不同频率摩法对脾虚家兔光镜下胃黏膜结构影响

更新时间:2009-03-28

中医认为,脾虚的本质是一组以消化系统为主的多系统多器官功能障碍的综合症候群,脾虚患者临症表现不仅在机能、代谢方面出现紊乱,而且在形态学上出现改变。胃肠黏膜形态学变化是揭示脾虚证本质的主要病理学依据之一[1]。摩法为推拿常用手法,临床多用于消化系统疾病,频率是其重要的技术参数。近几十年来,临床上对摩法的相关基础研究多围绕其方向与补泻的关系进行探讨,而关于摩法频率-效应的联系以及其生物学机制的相关研究却鲜有开展,限制了手法治疗发挥最大临床效用的发展。故本研究试图通过观察不同频率摩法对脾虚家兔胃黏膜的影响,探索摩法的频率补泻效应,并初步探讨其部分生物学机制。现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物

新西兰家兔48只,雌雄各24只,体重2.05~2.90 kg,由广州中医药大学实验动物中心提供及检疫[许可证号:SYXK(粤)2013-0001]。本次全部实验家兔均已通过广州中医药大学实验动物伦理委员会审查。家兔置于实验室自然光线,控制室温24℃,相对湿度50%下分笼适应性喂养7天。

1.2 药物与试剂

本实验造模使用药液分为A、B、C三种液。A液:按大黄∶芒硝=6∶1的重量比配成混合药液。B液:芒硝溶于大黄煎液配成含芒硝5%的混合液。C液:大黄煎液∶番泻叶煎液=2∶1的比例配成混合液,再加入芒硝至含量为5%以配成大黄、番泻叶与芒硝混合液。大黄饮片、芒硝饮片和番泻叶饮片全部均为袋装可溶制剂(广州致信药业有限公司)。苏木精-伊红染色(上海蓝季科技发展有限公司)。10%福尔马林中性固定液(中山市康乃欣生物医疗科技有限公司)。

1.3 仪器

实验数据采集采用NATIONAL INSTRUMENTS数据采集器,力值采集采用MFF多点薄膜压力测试系统(均由上海邑成测试设备有限公司生产),该设备可实时记录测试手法的压力、频率变化。

1.4 动物分组及模型制备

48只新西兰家兔适应性喂养后随机抽取8只作为K组(空白对照组)。依据“大忌苦寒之药伤其脾胃”理论,其余家兔灌胃造成脾虚模型[2-6]:各造模组在造模阶段第1~2天:接受A液按2 g/kg体重灌胃;造模阶段第3~6天:接受B液按3 g/kg体重灌胃;造模阶段第7~8天:接受C液按4 g/kg体重进行灌胃。灌胃1次/天,共8天。家兔出现泄泻、便溏、肛周污秽、纳呆、活动减少、毛色枯槁、行动缓慢、精神萎靡、嗜睡喜蜷伏、竖毛、体重下降表现,提示造模成功,符合脾虚动物模型标准[7]。造模结束后将灌胃的家兔随机分为摩法干预A组、B组、C组、D组和P组(模型对照组),每组8只,分笼饲养,作好标识。

1.5 干预方法

标本于固定液固定24小时后,蒸馏水水洗15分钟,梯度酒精脱水,沿纵轴方向石蜡浸蜡及包埋。浸蜡完毕后,放于操作台进行切片,苏木精-伊红染色,在光镜下放大100倍及400倍观察胃黏膜的大体情况,并比较各组胃黏膜厚度、炎症情况、主细胞和壁细胞数量的变化。炎症反应按Rauws计分法[9],即单核细胞在黏膜层浸润的程度(0~3),单核细胞在黏膜下层浸润的程度(0~3),浅表糜烂程度(0~3)。对每个参数,0是正常,1是轻度,2是中度,3是重度。总计分0~9分不等。

操作时手法控制频率处于50~100、101~150、151~200、201~250次/分四个频率段,施加同等力量值操作并保持1分钟,根据压力曲线变化,建立力-电压的拟合函数模型y=a+bx,通过校对器得出曲线的标准力量值和频率值。压力值的校对:选取5名测试者,每名测试10次,选取10次中手法压力曲线均值较接近的5组为样本,取其平均值,再以平均值的平均值作为手法治疗的标准操作值。手法操作时,全部治疗组手法压力均值均应控制在以上标准操作值上下不超过5%。各组手法操作时的实际频率和整个过程的平均频率都必须落在该组要求的频率范围内。

二是开展健康河湖创建试点。在各地区推荐河湖基础上,优先选择条件相对成熟的河湖开展健康河湖创建的试点。通过试点工作逐步完善健康河湖创建措施,建立健康河湖创建的技术体系和保障规程,形成完善的健康河湖创建体系。

近年来,香辣香菇酱研究的文献很多[16-19],主要是研究或者优化香菇酱的制作工艺以及配方,均是采用香菇柄为原料制作香菇酱。而本研究是利用通江香菇打造全产业链,前期已用香菇提取液制作香菇曲奇饼干,现在将提取后剩余的香菇肉制作香菇酱,充分开发了香菇的价值,使香菇资源得到最大化的利用,并且提取后的香菇肉较香菇柄鲜香味更浓郁、口感更好,所以制得的香菇酱本身就有良好的口感和鲜香味,无需加入味精、I+G、酵母提取物等添加剂,符合健康、绿色的食品理念。

1.6 取材和制片

对胃黏膜炎症反应程度进行组间比较,由表1可知:与K组比,P组、A组、C组、D组炎症程度增高有显著差异(P<0.05),其中P组炎症程度积分最高,胃黏膜炎症程度最为严重。与P组比,D组炎症程度积分无显著性差异(P>0.05)。A组与D组比炎症程度减轻有显著差异(P<0.05)。B组炎性反应程度与K组比较无显著性差异(P>0.05)。

1.7 观察指标

造模成功后第1天开始给予治疗。固定家兔仰卧位,充分暴露腹部穴位。打开电脑压力监测界面,操作者将传感器用医用胶布固定于家兔腹部后,使用右手食、中、无名指三指指腹于中脘、天枢(双)行指腹摩法,每穴5分钟,每日1次。穴位定位是采用比较解剖学和模拟人体经穴定位法结合进行新西兰兔穴位定位[8]。中脘穴:胸骨下端和肚脐下连线中点;天枢穴:肚脐与腹外侧连线内1/3与外2/3的交点。K组、P组不做手法干预。治疗组家兔对应的指腹摩法频率须在规定频率段内,具体为:A组、B组、C组和D组分别对应手法频率为50~100次/分,101~150次/分、151~200次/分和201~250次/分。操作时观察电脑显示的压力曲线变化,操作后保存压力曲线记录。手法干预共10天。过程中P组、A组家兔各死亡1只。

1.8 统计学处理

教师专业发展的国际研究表明,教师专业发展不是从理论学习到实践应用的线性过程,而是一个在实践体验的基础上结合经验进行反思的渐进过程[6]。体育教育专业的学生通过课堂内容整体化的学习,只能得到间接经验,无法将知识与技能内化。通过到中小学进行教学实践,接触到实际的教学对象与特定的教学情景,才能有效地对知识进行“输出”,进而达成理论知识与教学实践相结合的目的。阶段性的教学实习方式提供职前体育教师充裕的教学反思时间,在返回大学继续学习时将更有针对性,以弥补和克服上一阶段教育实习的不足,形成“理论-实践-理论”的良性循环,真正实现了从教育理论走向教育实践、由教育实践检验教育理论的研究目标。

2 结果

2.1 胃组织大体病理形态结构

K组(空白组)的胃黏膜层较厚,腺体及上皮细胞、主细胞、壁细胞排列整齐,细胞形状大小正常,偶见炎性细胞浸润。P组(模型组)的胃黏膜厚度最薄,胃黏膜腺体存在不同程度的萎缩、减少,胃小凹结构破坏,上皮细胞、主细胞、壁细胞排列紊乱、坏死,大量炎性细胞浸润。A组胃黏膜层变薄,腺体及上皮细胞、主细胞、壁细胞排列不整齐,偶见细胞形状大小改变,腺体轻度萎缩,可见炎性细胞浸润,黏膜下层血管有些充血。B组胃黏膜较厚,基本与K组接近,腺体及上皮细胞、主细胞、壁细胞排列整齐,细胞形状大小正常,少量炎性细胞浸润。C组上皮细胞排列不整齐,上皮细胞肿胀明显,发生明显的坏死,腺体萎缩明显,小凹结构破坏,可见炎性细胞浸润,黏膜下层结构疏松有些水肿。D组:上皮细胞排列不整齐,上皮细胞肿胀明显,发生明显的坏死,腺体萎缩明显,小凹结构破坏,大量炎性细胞浸润,黏膜下层结构疏松有些水肿。见图1。

全部数据输入SPSS 19.0进行统计分析。计量资料以均数±标准差±s)表示,多组间比较满足正态分布且方差齐性时进行单因素方差分析LSD法检验,方差不齐采用Dunnett T3法,以P<0.05为差异有统计学意义。

  

1 各组家兔胃黏膜光镜下病理切片(HE×100)

2.2 胃黏膜平均厚度、炎症反应程度以及细胞数量的比较

《厘正按摩要术》提出了“急摩为泻,缓摩为补”的概念。尤卓等[10]在临床观察证实频率-补泻-疗效之间的确存在联系。推拿手法是推拿治疗疾病的关键,手法的质量直接影响推拿的疗效[11],频率作为摩法的重要技术参数理应得到重视。本实验以频率为研究对象,对确立手法操作的规范化标准,对推拿学的发展有实际的促进作用。

 

1 不同频率摩法对脾虚家兔胃黏膜结构影响±s)

  

组别标本数胃黏膜厚度(mm)炎症程度积分(分)主细胞数(个)壁细胞数(个)K组816.15±0.781.50±0.7613.88±2.4736.38±6.52P组713.54±1.12a8.29±0.76a14.86±5.1123.86±7.52aA组714.55±2.304.86±1.07ab14.57±5.3233.43±8.42bB组816.04±0.97b2.88±1.55b21.75±5.01abc37.25±5.90bC组815.51±0.51b6.00±1.41abd21.00±5.66abc29.88±9.36dD组815.14±0.897.25±1.49acd17.38±5.4230.38±4.75

注: 与K组比较,aP<0.05;与P组比较,bP<0.05;与A组比较,cP<0.05;与B组比较,dP<0.05。

由表5可见,卡拉胶、黄原胶、槐豆胶的配比为7∶1∶1时果冻的感官评分最高。此时,产品色泽呈现黄色,硬度适中、弹性及透明度均比较理想,且咀嚼性好。当卡拉胶的添加量减少时,果冻的硬度不够、咀嚼感变差、弹性不好;当卡拉胶的添加量增加时,果冻的硬度就会加大、口感变差。故卡拉胶、黄原胶、槐豆胶的配比以7∶1∶1的较为理想,果冻效果最佳。

手法干预结束后,全部家兔禁食24小时后于耳缘静脉注射空气处死,操作者使用手术剪沿腹部正中线剪开家兔腹部皮肤及腹肌等组织以充分暴露腹腔内脏器。检视家兔腹腔内胃肠组织,确定取材部位,于胃(胃底近胃小弯处)取一个1.5 cm×1.5 cm的标本。取出标本放入蒸馏水中迅速充分洗净腔体内食物残渣、粪便等内容物后,置于装有10%福尔马林中性固定液的广口瓶中,瓶身贴上标签纸,标明标本编号。最后所出观察结果以同样标号表示。全部标本送至广州中医药大学电镜室进行切片的制作和观察评价。

对标本胃黏膜的主细胞数量进行组间比较,B、C组的主细胞数目较P组明显增多(P<0.05)。对标本胃黏膜的壁细胞数目进行组间比较,P组壁细胞数较K组显著减少(P<0.05)。A、B、C组的壁细胞数量有不同程度的增多(P<0.05),B组壁细胞数量增多最明显(P<0.05),且其均数值最接近K组。见表1。

3 讨论

对胃黏膜厚度进行组间比较,由表1可知:与K组比,P组胃黏膜厚度变薄(P<0.05)。B、C两组家兔胃黏膜厚度增加,与P组比均具有统计学意义(P<0.05),B组的频率段干预后黏膜厚度增厚最明显,且最接近K组胃黏膜厚度。

当前,医院的管理体制不够健全,缺乏一套有效的保障体系。主要表现在以下三个方面:一是缺乏“互联网+党建”相关的制度。主要体现在没有明确党务工作者、党员的职责权限、党建网络管理员的管理制度、奖惩制度不够完善;二是法律法规不够健全。没有充分考虑“互联网+”具有信息传播速度快、不可控等特点,“互联网+党建”的发展需要相应的法律法规做支撑,但当前我国并没有制定相应的法律法规,缺乏行之有效的网络监管机制;三是缺乏相应的网络安全制度。[2]“互联网+”的发展是把双刃剑,网络舆论的复杂性使得网络信息不安全的风险加大,网络舆论进行正确的引导缺乏网络安全制度作保障,意识形态工作就不好加强。

“脾运化”功能与胃“受纳、腐熟水谷”密切相关。有研究表明[12],脾胃功能失调是胃癌癌前病变的重要发病机制。胃疾发病经历了“正常黏膜→炎症→癌前病变→早期胃癌→进展期胃癌”的过程[13-14],可见抑制炎症的产生是治疗胃部疾病癌前病变的第一步,而Rauws计分法是评价胃黏膜病损程度较为稳定的重要指标。主细胞和壁细胞是胃黏膜的重要组成部分。主细胞主要分泌胃蛋白酶原,壁细胞主要分泌盐酸。正常情况下,二者共同参与了胃酸分泌和调节,发挥其增强胃黏膜屏障机制的作用[15]。这些指标均能够有效反映机体脾虚证胃功能的变化。

本实验目的在于研究手法频率—效应的特异相关性,而非研究手法在穴位和非穴位操作的特异性,故未设置非穴位推拿对照组。中脘为胃之募穴,又是腑之会,天枢乃胃经穴位,又是大肠的募穴。二者合用可调节胃肠功能。穴位效应偏于中性,尽可能地减少穴位补泻效应对手法频率补泻效应产生的偏差,使实验更趋于严谨。采用MFF多点薄膜压力传感器测试系统实时监控手法压力、频率,能保证实验中的压力、频率达到恒定,是使实验各项数据趋于稳定的重要保证。

被告:The first,that Opupa,send the phone number to Nigeria to prosecute.(首先,那个Opupa,把电话号码送回尼日利亚去起诉。)

本实验发现经造模后P组的胃黏膜厚度显著减少、炎症程度最严重,表明苦寒泻下法对家兔胃黏膜产生了明显的损害。经过B、C组频率的手法干预,家兔的胃黏膜增厚,B组的频率段干预后黏膜厚度增厚最明显。A组50~100次/分、B组101~150次/分的摩法能减轻脾虚家兔胃黏膜炎症程度,101~150次/分手法频率使炎症程度改善最明显,且能显著促进胃黏膜主细胞及壁细胞的生成。综上所述,本次实验苦寒泻下法造模形成的脾虚家兔,其胃黏膜损害主要表现在黏膜腺体厚度变薄、炎细胞浸润明显、以壁细胞为主的黏膜屏障遭到损伤。频率不高于150次/分的摩法对脾虚家兔胃黏膜损伤起到了治疗作用,即“缓摩为补”;101~150次/分的摩法能显著修复胃黏膜损伤,增强胃黏膜屏障,为干预脾虚家兔的有效频率段。本实验尚不能得出高频率段的摩法具有损伤胃黏膜的结论。摩法改善脾虚证患者临床症状的机制之一可能是通过改善胃黏膜的细胞结构增强屏障功能,摩法可能为预防及治疗胃癌癌前病变进展的有效手段。

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曹晓玲,王继红
《环球中医药》 2018年第03期
《环球中医药》2018年第03期文献

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