高血压病作为严重危害人类身体健康的常见心血管病之一，也成为全球范围内的重大公共卫生问题[1]。针灸对高血压疗效显著，其降压作用涉及到脑部多个功能区神经-内分泌-免疫网络。课题组前期发现，针刺降压与调节肾脏、心脏、下丘脑等多处的神经递质如NE、5-HT和NO有关[2-3]。高血压的发病涉及了心、脑、肾诸多脏器，而小脑除影响身体平衡功能外，通过与迷走神经背核的联系也可影响如血管、呼吸与胃肠等内脏器官的功能，同时也参与中枢血压调节过程[4-5]。于隽等[6-9]发现与针刺调节血压相关的直接激活脑区包括小脑后叶、扣带回、背侧丘脑、额叶联合皮质；且针刺太冲与非穴相比，可激活小脑-前叶、扣带回、延髓等部位。说明小脑也是参与针刺降压的脑部区域之一。那么，针刺通过小脑的降压作用是否也与其调节中枢神经递质的分泌有关？故本研究通过观察针刺捻转补泻法对自发性高血压大鼠小脑神经递质NE、5-HT和NO含量影响，探讨捻转补泻手法对SHR小脑损害的调节机制，并比较捻转补泻手法的效应差异。

1　材料与方法

1.1　实验动物

SHR大鼠40只，9周龄SPF级雄性，WKY大鼠10只，9周龄SPF级雄性，体重200～250 g，均购自北京维通利华实验动物中心，饲养于北京中医药大学针灸生物学动物室(室温20～25℃，相对湿度50%～65%)，自由进食及饮水。

1.2　实验仪器

中研太和牌0.16 mm×7 mm无菌针灸针(无锡佳健医疗器械有限公司)，动物断头用铡刀(北京中医药大学针灸学院生物机能实验室),内旋螺纹冻存管(北京康晖煜科技有限公司)，无创血压仪(BP-6成都泰盟生物仪器公司)，莱卡切片机(型号：RM2235)，YT-CJ-2ND超净操作台(北京亚泰科隆仪器有限公司)；光学显微镜，离心机：LEGEND MICRO17R(Thermo公司)；电泳系统(DYCP-31E北京六一厂)，超低温冰箱(SANYO，MDF-U50A日本)。

1.3　动物分组

按照随机数字表随机分为模型组、针刺组、针刺补法组、针刺泻法组，每组10只。WKY大鼠10只作为空白对照组。

1.4　取穴

参照《实验针灸学》教材。“太冲穴”在大鼠后肢足背第1、2趾骨间凹陷处。于每天下午2:00～4:00之间集中针刺，双侧“太冲穴”每天交替进行，针刺连续6天休息1天，持续24天，操作均由同一人完成。取“太冲穴”(双侧)，用0.16 mm×7 mm针灸针直刺1～2 mm。各组操作如下：(1)空白组：每日抓捉刺激(动作同针刺组)。(2)模型组：每日抓捉刺激(动作同针刺组)。(3)针刺组：针刺太冲穴，留针20分钟，期间不行手法。(4)针刺补法组：针刺太冲穴，以右手为刺手，大拇指向前用力捻转，轻力向后退回，捻转幅度为360度/次，60次/分钟，持续捻针3分钟，留针17分钟。(5)针刺泻法组：针刺太冲穴，以右手为刺手，大拇指向后时用力捻转，轻力向前退回，捻转幅度360度/次，60次/分钟，持续捻针3分钟，留针17分钟。各组共治疗28天，每隔6天休息1天，每日下午2:00～4:00之间治疗1次。施行手法时，以节拍器辅助便于控制捻针频率和时间，将节拍器发音频率设定为：1分钟，60次/分钟。

1.5　指标检测

1.5.2　小脑NE、5-HT、NO含量测定　各组大鼠在麻醉状态下立即处死取材，各组先腹动脉取血、断头摘取小脑组织，再经液氮冷存，后存放在-80℃冷冻室内。用Elisa法检测各组大鼠小脑组织中NE、5-HT、NO的含量。

1.5.1　血压测定　在室温(22±2)℃条件下，每天上午8:00～12:00，将清醒状态大鼠于36℃预热(用温控器调节温度恒定)约15分钟，用无创血压仪测量大鼠安静、清醒状态下的尾收缩压，连续测3次，取平均值。在针刺前1天及接受针刺刺激的第3、8、13、18、23、27天测量血压。注意：测量血压过程动作要轻柔，加温时间要固定在15分钟，网套及尾套尺寸。

1.6　统计学处理

从混合烃组分的MMP实验结果得到以下认识:混合体系组分中芳香烃为主的方案的MMP最大、环烷烃为主的方案的MMP次之、烷烃为主的方案的MMP最小，这与单组分烃类的实验结果相符;与单一组分主要区别在于，混合烃组分/CO2的MMP均小于相同碳数的单组分/CO 2的MMP，这主要是混合组分中不同分子作用力综合作用的结果。

应用SPSS 20.0统计软件进行统计学处理，计量资料以均数±标准差±s)表示。数据符合正态分布，组间比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)，两两比较采用LSD-t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

针刺后与空白组比较，模型组、针刺组、针刺补法组和针刺泻法组小脑中NE、5-HT含量显著升高(P<0.05)，NO含量显著降低(P<0.05)；与模型组比较，针刺组、针刺补法组、针刺泻法组小脑中NE、5-HT含量显著降低(P<0.05)；与针刺补法组和针刺组比较，针刺泻法组NE显著降低(P<0.05)，而针刺组和针刺补法组之间未见统计学差异(P>0.05)。与针刺组比较，针刺泻法组NO显著升高(P<0.05)，而补法和针刺间未见统计学差异(P>0.05)。见表2。

2　结果

2.1　各组大鼠干预前后收缩压的变化

楚艳出生在陕西省西安市一个文艺爱好者家庭，古都的历史遗迹，启蒙着楚艳对美的感知——从小，碑林、青龙寺就是她的游乐园，十多岁的年纪，没事就背着画板，在陕西历史博物馆里描摹唐代仕女图、宋代陶俑。

实施最严格的耕地保护制度。全省耕地保有量1.14亿亩，划定永久基本农田9587万亩，连续18年实现耕地占补平衡，保障粮食生产能力稳步提升。建立生态红线管理和生态补偿制度，对重要生态区域实施红线管理，对生态公益林、重要湿地和海域海岛保护给予生态补偿。建立自然保护地管理制度。在资源集中、区位重要、特色鲜明区域，建立各类省级以上自然保护区45处、地质矿山公园67处、森林公园119处、湿地公园204处、海洋公园12处，典型自然生态系统和生物多样性得到有效保护。持续推进矿产资源整顿规范，取缔关闭非法采矿和一批露天开采矿山，建成国家级绿色矿山37处，数量居全国第二位。

 

表1　各组大鼠治疗前后收缩压的变化±s，n=10，mmHg)

  

组别针刺前1天针后第3天针后第8天针后第13天针后第18天针后第23天针后第27天空白组109．63±3．01112．34±2．71114．96±2．18117．25±1．5119．53±1．20121．10±1．22122．99±1．36模型组165．94±3．93a169．11±3．02a171．94±2．20a173．74±2．25a175．74±2．34a177．58±2．55a179．39±2．46a针刺组165．04±4．42a166．26±3．54ab167．89±3．19ab168．63±3．20ab169．50±3．03ab170．34±2．68ab171．08±2．45ab补法组166．79±1．42a165．82±1．95ab164．88±1．60abc163．47±1．50abc162．38±1．58abc160．78±1．8abc158．84±1．66abc泻法组167．44±3．06a165．29±3．05ab162．31±2．85abc159．79±2．62abd157．42±3．08abd155．88±2．23abcd153．33±3．05abcd

注：与空白组同期比较，aP<0.05；与模型组同期比较，bP<0.05；与针刺组同期比较，cP<0.05；与针刺补法组同期比较，dP<0.05。

近些年，高血压患病率逐年增高，是造成心、脑损害的主要原因之一。本实验中对自发性高血压模型，在针刺前及针刺后第3、8、13、18、23、27天多次测，发现造模后各组包括模型组、针刺组、针刺补法组、针刺泻法组大鼠收缩压比空白组比较均显著升高；说明SHR大鼠模型制备成功。其中在针刺前，模型组、针刺组、针刺补法组、针刺泻法各组之间收缩压无统计学差异(P>0.05)；自针后第3天开始至27天，针刺、针刺补法、针刺泻法组血压与比模型组比较显著降低(P<0.05)；说明针刺治疗第3天即可发挥降压效应；其中，第3天时三个不同治疗组之间无统计学差异(P>0.05)；研究发现，针刺的留针时间、频次是影响针刺疗效的关键共性因素，而留针时间、频次参数的确定均应依据针刺作用时效关系研究，前二者对后者具有不可分割的依赖关系[10-12]。自针后第8天开始至27天，针刺补法、针刺泻法与针刺组比较显著降低(P<0.05)，在自针后第13天开始至第27天，针刺泻法组均比针刺补法组血压显著降低(P<0.05)，说明在针刺8天后不同手法会产生不同针刺效果；针刺泻法要比针刺补法的降压效果显著。课题组前期研究表明，针刺可以显著降低SHR大鼠血压，且针刺补泻手法发挥降压作用有明显的时间效应，这是本次发现的创新之处，同时也与上述的研究结论相呼应。

2.2　各组大鼠小脑组织中NE、5-HT、NO含量的影响

结合喀什市色满乡实际，大力发展蔬菜种植业、特色林果业、养殖业，在政策上给予支持，形成支柱产业，发挥产业支撑的保障作用，增强贫困户自我造血的能力［2］。

干预前及干预后第3、8、13、18、23、27天多次测量后，模型组、针刺组、针刺补法组、针刺泻法组的大鼠收缩压与空白组比较均显著升高，差异有统计学意义(P<0.05)；其中在针刺前组，模型组、针刺组、针刺补法组、针刺泻法各组之间收缩压无统计学差异(P>0.05)；自针后第3天开始至27天，针刺组、针刺补法组、针刺泻法组血压比模型组显著降低(P<0.05)；其中针后第3天时，三个干预组之间比较无统计学差异(P>0.05)；自针刺后第8天开始至27天，针刺补法组、针刺泻法组与针刺组比较显著降低(P<0.05)，而针刺补法与针刺泻法组比较，未见统计学差异(P>0.05)；自针刺后第13天开始至第27天，针刺泻法组均比针刺补法组血压显著降低，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

 

表2　各组大鼠小脑组织中NE、5-HT、NO含量的影响±s，n=10)

  

组别NE(μmol/g)5⁃HT(μmol/g)NO(nmol/mg)空白组13．56±1．735．26±0．269．31±2．38模型组23．26±1．89a9．48±1．10a5．41±1．58a针刺组18．90±2．56ab7．18±1．25ab6．40±2．58ab补法组18．36±3．27ab6．38±1．18ab7．37±2．88ab泻法组16．51±2．43abcd6．36±1．09abcd8．50±3．89abc

注：与空白组同期比较，aP<0.05；与模型组同期比较，bP<0.05；与针刺组同期比较，cP<0.05；与针刺补法组同期比较，dP<0.05。

3　讨论

在生理或病理刺激下，(疼痛、饥饿、恐惧或是愤怒)，下丘脑-垂体-肾上腺轴激活，引起交感神经兴奋，单胺类物质释放[13](肾上腺素、去甲肾上腺素、5-HT等)，可以直接作用于心血管系统，也可通过影响其他递质的释放，如与AngⅡ相互影响，使血管收缩，血容量增加，引起血压升高[14]。近年来认为脑内去甲肾上腺素的系统紊乱与多种动物模型的高血压发病有关，NE可使家兔动脉血压出现持续性升高，作用时间随剂量的增加逐渐延长[14-15]。本实验结果中与空白组比较，模型组、针刺组、补法组升高(P<0.05)；说明SHR模型鼠血压升高与其小脑中NE、5-HT的升高有关，这与前期研究一致。与模型组比较，针刺组、补法组、泻法组均可以显著降低NE、5-HT含量；与补法组和针刺组比较，泻法对NE和5-HT的降低作用更显著(P<0.05)，而针刺组和针刺补法组之间未见显著差异(P<0.05)，说明针刺降压作用可能与其降低小脑内NE、5-HT含量有关。

与空白组比较，模型组、针刺组、补法组、泻法组小脑NO含量显著降低(P<0.05)，表明引起的血压升高与小脑内NO的变化有关[16-17]，这与前期研究结果一致，NO同时还可以促进其他缩血管物质如组胺、AngⅡ、NE的释放[18]，增强收缩血管作用。而针刺组、针刺补法组、针刺泻法组可显著升高小脑NO含量(P<0.05)；与针刺组比较，针刺泻法组的调节作用更加显著，而补法组和针刺泻法组间未见显著差异(P>0.05)，说明NO也是针刺调节血压作用的中枢递质之一，这与前期结果相符，针刺同时调节中枢和外周NE、NO和5-HT等神经递质的分泌,调整中枢及外周交感神经系统的活动，从而参与了针刺的降血压过程[19]。针刺对小脑中NE、NO、5-HT的调节作用表明针刺可以使中枢中升高的NE、5-HT含量得到下降，NE、5-HT递质参与了针刺捻转补泻手法对自发性高血压大鼠的血压调节过程。

综上，针刺、针刺补法、针刺泻法均可显著降低SHR大鼠收缩压，且不同的针刺手法会随着时间的延长产生不同的针刺效应。本实验发现，针后第8天开始，补法组和泻法组的效应要强于普通针刺组；针后第13天开始，针刺补法组与针刺泻法组的降压效应开始产生差异，且针刺泻法组的降压作用要强于针刺补法组，这在一定程度证实了针刺不同手法之间存在时间差异。由此证实，针刺组、针刺补法组、针刺泻法组均能够有效地降低SHR大鼠血压，这可能与调节中枢的单胺类神经递质NE、5-HT、NO含量有关，且补法和泻法具有截然不同的效应。鉴于高血压复杂的发生发展机制及实验所限，目前针刺补泻手法对高血压病小脑组织中各神经递质之间如何进一步相互影响尚不是十分明确，还需进一步研究探讨。

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学生思维发展能力的培育，可以通过多种形式进行，比如写作、阅读、实践活动等，在语言的综合运用当中，学生的思维能力能够得到有效发展。比如在进行《鸿门宴》的教学过程中，由于其中人物特色鲜明，故事情节生动紧张，非常有助于学生综合思维能力的培养。因此，可以采用让学生扮演角色的方式进行“鸿门宴”的重现。在此过程中，教师可以根据学生的学习水平和特点进行角色分派，在表现刘邦、项羽、樊哙、项庄等人的语言、神态的过程中，能够加强学生语言的运用能力，促进思维发展能力的提升。