结直肠癌(colorectal cancer，CRC)是最常见的消化道恶性肿瘤之一。近年来随着人们饮食结构的改变及老龄化趋势，我国CRC的发病率和死亡率均呈上升趋势[1]。据报道，早期局限性CRC的5年生存率高达90%，但可获得早期诊断的患者不足40%，多数患者发现已到达中晚期[2]，而一旦发生远处转移，其5年生存率显著下降，仅为11%[3]。除此之外，CRC的转移复发也是CRC诊断和治疗的难点之一。因此，探索CRC的早期诊断和判断预后的分子指标对于改善CRC患者的生存质量及降低复发风险至关重要。近年来关于CK20、PKM2和HIF-1α在肿瘤组织中的异常表达逐渐受到重视[4]。本研究通过免疫组化法检测CRC组织与正常组织中CK20、HIF-1α及PKM2的表达，探讨CK20、HIF-1α及PKM2对CRC风险性的预测价值及其在CRC组织增值、侵袭中的意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料:选取2015年12月至2016年12月间我院结直肠癌手术切除组织标本73例，为结直肠癌组：纳入的73例患者均经病理诊断确诊为结直肠癌，在术前均未进行放、化疗或免疫治疗。其中男性39例，女性34例，平均年龄(46.2±13.2)岁。分化程度：高分化18例，中分化35例，低分化20例；Dukes分期：A期15例，B期35例，C期21例，D期2例；另选取30例纤维结肠镜活检标本中的正常结直肠组织作为正常对照组。

实验组别:考虑到土壤肥力,分别设置添加无机肥(IF)和菌渣(5%SMS)两个处理组,其中CK为空白对照,不作处理.蓖麻种子用30%过氧化氢浸泡10 min,每盆播入5颗种子,发芽7 d后间苗至每盆3株.采用重力法每天加入蒸馏水,使土壤保持含水量为60%.

1.2 检测方法:运用免疫组化法检测CK20、HIF-1α及PKM2的表达。收集标本，并对其进行分类整理。将组织标本浸入福尔马林中进行器官组织的固定，3d后取出标本并进行石蜡包埋、切片。羊血清封闭1h，加100～400μL稀释后的一抗孵育(4℃，过夜)，再加100～400μL稀释后的二抗孵育(室温，30min)。以上各步骤均用PBS(0.01mmoL/L，PH7.4)洗3次，每次5min，DAB显色，苏木素复染，蒸馏水冲洗，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，封片。

1.3 结果判定:染色结果采用BX50显微镜(日本Olympus公司)进行观察，胞质内和胞膜上有棕黄色颗粒沉着为阳性细胞。每个样本显微镜下随机选择五个高倍视野进行拍照。光密度值采用Image-Pro Plus图像分析软件(Media Cybernetics公司)进行分析。

 

表1 不同临床特征下CK20及HIF-1α在结直肠癌组织中的阳性表达n(%)

  

临床特征例数CK20阳性表达 χ2 PHIF-1α阳性表达 χ2 PPKM2阳性表达 χ2 P性别男3918(46.2)0.0060.93820(51.3)0.0120.91332(82.1)0.0820.775女3416(47.1)17(50.0)27(79.4)年龄<503821(55.3)1.3650.24320(52.6)0.0200.88732(84.2)0.2210.639≥503524(68.6)19(54.3)28(80.0)分化程度高分化1813(72.2)2.9340.2317(38.9)1.2250.54212(66.7)5.7630.056中分化3521(60.0)19(54.3)30(85.7)低分化209(45.0)9(45.0)19(95.0)淋巴结转移有2420(83.3)11.7570.00117(70.8)5.8070.01624(100.0)10.0370.002无4920(40.8)20(40.8)33(67.3)Dukes分期A-B期5014(28.0)5.4990.01918(36.0)7.1330.00833(66.0)10.1940.001C-D期2313(56.5)16(69.6)23(100.0)

2.2 CK20、HIF-1α及PKM2的相关性分析:CK20与HIF-1α的相关性分析结果显示：相关系数r=0.751，P=0.008，说明在结直肠癌组织中CK20与HIF-1α成正相关。PKM2与HIF-1α的相关性分析结果显示：相关系数r=0.926，P=0.000，说明在结直肠癌组织中PKM2与HIF-1α同样成正相关。

2 结 果

2.1 CK20、HIF-1α及PKM2在结直肠癌组织中的表达与临床特征的关系:不同年龄、性别及分化程度下，CK20、HIF-1α及PKM2在结直肠癌组织中的阳性表达率无统计学差异(P>0.05)。而不同淋巴结转移和Dukes分期下，CK20、HIF-1α及PKM2在结直肠癌组织中的阳性表达率有统计学意义(P<0.05)，见表1。

1.4 统计学方法:用SPSS23.0软件做统计处理，计量资料用表示，当方差齐性时，两样本均数的比较采用t检验，当方差不齐时，两样本均数的比较采用t'检验；计数资料用n(%)表示，采用χ2检验或R×C表资料的χ2检验，P<0.05时认为差异有统计学意义。

(3) 围岩开挖后变形发展的形式受主要软弱结构面的控制。第二弱结构面上方斜坡的位移和应力较大，第二控制结构对边坡开挖后的变形起控制作用。由于第一结构面的存在，在此结构面处位移和剪切应变都为最大。在外界因素诱发下，第一条结构面以外岩体将首先沿该结构面发生失稳滑动，第二条结构面以外岩体为潜在滑体，第二条结构面为潜在滑带。

1.8.1 腹痛程度 采用NRS‐11评价［8］，NRS‐11由0到10共11个数字组成，患者根据疼痛强度赋值，数字越大则疼痛程度越严重。0无痛，1～3轻度疼痛（疼痛不影响睡眠），4～6中度疼痛，7～9重度疼痛（不能入睡或者睡眠中痛醒），10剧痛。与基线比较，NRS‐11下降≥50%，为疼痛改善。

2.3 CK20、HIF-1α及PKM2在结直肠癌组织与正常组织中的平均光密度值的比较:结直肠癌组中CK20、HIF-1α及PKM2的平均光密度值均显著高于正常结直肠组织(P<0.05)，见表2。

 

表2 CK20及HIF-1α在结直肠癌组织与正常组织中的平均光密度值的比较

  

组别例数CK20HIF-1αPKM2对照组301220.4±33.51620.6±100.44024.5±423.4结直肠癌组733171.2±45.24677.3±265.69788.2±325.1t或t'5.3705.9122.282P0.0340.0230.047

3 讨 论

【参考文献】

其中，CK20的表达具有严格的上皮组织特异性，在非上皮来源的正常血液中不表达，因此有研究认为CK20的表达可能与淋巴结转移和浸润程度相关。

[5] Ping-Ping Bao, Ying Zheng, Chun-Xiao Wu, et al.Cancer incidence in urban Shanghai, 1973-2010: an updated trend and age-period-cohort effects[J].BMC Cancer,2016,16: 284.

丙酮酸激酶(PK)是糖酵解三大关键酶之一，有4种同工酶并呈组织特异性，其中PKM2是PK同工酶中的一种。当恶性肿瘤发生时，其他三种PK同工酶表达减少，而PKM2表达增加[9]。另外，有研究指出[10]高水平的糖酵解是癌细胞的重要特征之一，而PKM2是其中一个重要的调节因子。同时，PKM2还受多种转录因子、癌基因蛋白等复杂因素的调控，在肿瘤的增殖和细胞周期进展中起着重要作用[11]。

[8] 王茜,时延龙,毕经旺.p-mTOR与HIF-1α在结直肠癌组织中的表达及其临床意义[J].中国肿瘤生物治疗杂志,2015,22(6):779～784.

[7] 林萍，邓涛，叶彦,等.人结直肠癌组织中mTOR、HIF-1α、PKM2的表达及临床意义[J].疑难病杂志,2015,14(4):380～383,441.

CRC是我国三大肿瘤(肺癌、乳腺癌、结直肠癌)之一，在男性癌症发病人数中仅次于肺癌，在女性癌症发病人数中仅次于乳腺癌[5]，且多数CRC患者发现时已到达中晚期，而一旦发生远处转移，其生存率显著下降。因此，CRC的早期诊断和预后评估至关重要。而国内外研究表明：CK20、HIF-1α及PKM2的表达在CRC的增值、侵袭中具有重要意义。

[1] 汪建平.中国结直肠癌治疗现状-进步与局限并存[J]中华胃肠外科杂志,2012,15:989～992.

[2] Wang J, Liu L, Qiu H, et al. Ursolic acid simultaneously targets multiple signaling pathways to suppress proliferation and induce apoptosis in colon cancer cells[J].PLoS One,2013,8(5):e63872.

[3] Edwards BK, Brown ML, Wingo PA, et al. Annual report to the nation on the status of cancer, 1975-2002, featuring population-based trends in cancer treatment[J].Natl Cancer Inst,2005,97(19):1407～1427.

[4] 顾晋.重视结直肠癌的术前分期规范结直肠癌的综合治疗[J].中华外科杂志,2012,50(3):193～195.

HIF是由a和β两个亚基组成的异二聚体转录因子，其表达受细胞内氧浓度的调控，是一种氧应答调控因子，也是肿瘤进展的始动因素。其中，HIF-1α是最早被认识的HIF异构体。有研究指出：在无新生血管生成的微小实体瘤阶段，HIF-1α可通过调控糖酵解为肿瘤细胞供应能量；当肿瘤扩大时，HIF-1α又可通过控制血管的生成来调节氧的运输能力，为肿瘤的增殖、侵袭和转移提供条件。另外，周明利[6]指出，HIF-1α的过度表达与恶性肿瘤的不良预后密切相关。HIF-1α通过调节其自身的表达及不同靶基因的转录活性，参与肿瘤的增殖、侵袭及转移等过程。林萍等[7]研究得出：结直肠癌组HIF-1α的平均光密度值显著高于正常组，且结直肠癌组在不同年龄、性别及分化程度下的HIF-1α的表达率无统计学差异，HIF-1α的表达与结直肠癌的增值、转移有关，可作为CRC靶向治疗作用位点。王茜等[8]也得出了相似的结论。

[6] 周明利.HlF-1α与EMT在肿瘤中的作用及意义研究进展[J].中国普通外科杂志,2012,21(9):1132～1136.

综上所述，援疆实习支教是师范生实践育人的重要形式和载体，也是河西学院“向西发展”服务新疆地方经济社会建设的重大举措。援疆实习支教对大学生思想政治教育的意义，体现在继续规范化、制度化、系统化的教育管理，深刻挖掘思想政治教育的实践内涵，发挥援疆实习支教的榜样、示范作用，开辟高效在实践教学中加强大学生思想政治教育的有效途径，实现高校人才培养质量提升和服务地方经济社会建设的基本功能。

本研究中CK20、HIF-1α及PKM2在CRC标本中的表达显著高于正常结直肠组织，且与淋巴结转移和Dukes分期有关(P<0.05)。另外，相关性分析表明：在结直肠癌组织中CK20和PKM2均与HIF-1α的表达成正相关(P<0.01)。表明CK20、HIF-1α及PKM2在维持肿瘤细胞的能量代谢、增殖、侵袭和转移等起着重要作用，对RCR的增值和转移具有一定的预测价值。

*本文系2009年广西艺术学院校级科研与创作项目“铜版画无毒环保制版技术研究”（编号KY200911）成果。

[9] Nemazanyy I, Espeillac C, Pende M, et al.Role of PI3K, mTOR and Akt2 signalling in hepatic tumorigenesis via the control of PKM2 expression[J].Biochem Soc Trans,2013,41(4):917～922.

[10] 时蒙昆,时雨,王群.肿瘤中m2型丙酮酸激酶的表达、功能及调节[J].复旦学报(医学版),2017,44(2):217～223.

25例矮小儿童中，垂体前叶发育不良15例（60%），垂体柄阻断综合征2例（8%），颅咽管瘤术后垂体前叶薄小2例（8%），垂体增生6例（24%）。

[11] 孙倩.m2型丙酮酸激酶(PKM2)在肿瘤代谢和发生中的作用[J].基础医学与临床,2012,32(5):462～467.

苏轼被排挤出京城以后，并没有停止抵制王安石变法，他用自己亲眼看到的事实向朝廷反映变法后的真实情况，申述自己的观点。熙宁四年(1071)十一月，苏轼外放到杭州任通判时，亲眼看到王安石变法给人民带来的灾难，再次《上神宗皇帝书》，他说:“天下莫危于人主也。聚则为君民，散则为仇雠，聚散之间，不容毫厘。故天下归往谓之王，人各有心谓之独夫，人心之于人主也，如木之有根，如灯之有膏，如鱼之有水。木无根则槁，灯无膏则灭，鱼无水则死，人主失人心则亡。”苏轼认为，民心的得失是国家兴亡的头等大事，得人心者为“王”，失人心者为“独夫”。