当前肝移植己成为治疗终末期肝病和暴发性肝衰的金标准，良性肝脏疾病肝移植术后5 a生存率可达77.3%[1].但是随着肝脏移植适应证的拓广和移植技术的不断改进和深入，使供肝短缺的问题日益突出.活体部分肝脏移植的实施可在一定程度上缓解的供肝短缺问题.活体肝移植时，供体的安全应放在第1位.如果活体部分供肝体积过大会威胁供者的安全，而供肝体积过小则与受体不匹配就会导致小肝综合征[2].围绕这些问题，本课题通过利用特利加压素和FK-409的不同药理机制的协同作用，探究联合应用特利加压素和FK-409联合应用在大鼠减体积肝移植中对移植肝的保护作用，为寻找减体积肝移植术后小肝综合症发生的潜在应对方案提供实验基础.

1 材料与方法

1.1 实验动物

实验所用8周龄SPF级SD雄性大鼠购自北京华阜康生物科技股份有限公司，饲养于昆明医科大学SPF级动物实验中心，饲养方案、环境和动物实验处理方案由昆明医科大学动物实验伦理有关规定批准并依照执行.其中，根据不同给药处理办法不同将大鼠分为4组，未予特殊药物处理为对照组（Control group），特利加压素处理组（Terlipressin treatment group），FK-409处 理 组（FK-409 treatment group）和特利加压素联合FK-409处理组（Terlipressin and FK-409 treatment group），每组 4只大鼠比较术后门静脉压力及血清肝功能指标，每组10只大鼠比较存活时间.

我认为照片蕴含的力量就是它背后的故事，所以我试图寻找热衷分享故事的人。我会永远寻找不同的文化和故事，而不仅仅是一个拍摄的题材。

1.2 术后检测内容及材料

4组大鼠门静脉压力测使用24G穿刺针直接穿刺门静脉，连接压力换能器（YP100型压力换能器，成都仪器厂）并与多通道生理信号采集处理系统（RM6240B，成都仪器厂）相连，测定门静脉开放后 5 min、10 min、20 min、40 min、60 min的压力变化；血清生化指标测定使用术后各时点去非抗凝血样本3～5 mL，4℃，2 500 r/min离心 10 min，取上清保存于-80℃冰箱，待标本聚齐后送生化室检测术后1 d、4 d、7 d谷丙转氨酶（ALT）及总胆红素水平.HE切片染色：移植术后第10天取各组存活大鼠断颈处死后切取移植肝，甲醛固定后制成石蜡切片并保存，切片行HE染色镜下观察.

本文结合网架施工使用阶段出现的质量问题，针对网架破坏情况做分析，并对不同节点不同受力构件提出针对性的加固措施，有效提高了构件的抗拉及受压屈曲承载力.不仅满足设计使用要求，而且，施工简单、快捷、有效，最大限度地节约资源，降低成本。

1.3 移植手术方案及给药处理

小肝综合症（small-for-size syndrome，SFSS）起源于成人活体肝移植和劈离式肝移植中减体积移植肝的广泛应用，其发病原因至今未被明确阐述[3].使用减体积肝移植往往导致肝移植物无法满足受体肝脏需求从而诱发凝血功能障碍、黄疸、腹水、肝性脑病甚至死亡.这一系列的临床表现与移植肝体积不足密切相关，因此这一系列征象被称之为小肝综合症（SFSS）[4].移植肝体积过小、移植肝细胞数量少加之门静脉灌注压力升高导致了急性肝细胞损伤，随后阻碍了干细胞再生和肝体积重构[5].先前的研究在79例活体肝移植患者中发现SFSS高发于术后2～7 d门静脉压力显著增高者[6].SFSS同样普片存在于大范围肝脏切除残肝体积过小的患者，尤其高发于存在肝硬化的患者中[7].先前的研究在59例因肝胆道疾病行肝切除患者中发现门静脉血流压力增高增加了肝切除术后SFSS的发生率[7].这些研究表明门静脉血流动力学异常是诱发SFSS的重要因素[5].因此，调节术后门静脉高灌注并最大程度防治损肝细胞损害是降低SFSS 发生的关键[5，8，9].除了必要的手 术技术改 良外，一些药物被证实可以有效降低术后门静脉压力并改善移植肝功能从而有效防治SFSS[10-12]，先前的研究表明生长抑素可有效降低植肝后门静脉再灌注压力、保护移植物，并有报道使用生长抑素联合普萘洛尔成功治疗活体肝移植后SFSS，但是生长抑素、非选择性β受体阻断剂更多的在临床用于门脉高压、尤其是用于控制急性食管胃底静脉曲破裂出血，生长抑素类药物对于肝脏再生的抑制作用也限制了其应用于移植肝或肝切除术后SFSS的防治[10-13].后叶加压素虽然有较好的内脏血管收缩功能，但是由于它较多的副作用导致较少使用后叶加压素治疗门静脉高压[14].因此，这些药物在减体积肝移植术后SFSS防治的应用上受到了限制.

1.4 统计学处理

在减体积肝移植模型中联合使用特利加压素、FK-409可有效保护移植肝脏.使用30%体积肝移植大鼠作为减体积肝移植模型，受体按照不同的术后处理方案分为4组：对照组（Control group），特利加压素处理组（Terlipressin treatment group），FK-409处理组（FK-409 treatment group）和特利加压素联合FK-409处理组（Terlipressin and FK-409 treatment group）.术后在不同时间点检测各组受体大鼠门静脉压力，结果提示使用FK-409处理的受体大鼠术后5 min、10 min、20 min、40 min、60 min门静脉压力与对照组相比未见明显降低（图1）.单独使用特利加压素（P＜0.01）或使用特利加压素联合FK-409（P＜0.001）处理受体大鼠可有效在术后不同时间点降低门静脉压力（图1）.此外，使用特利加压素联合FK-409处理组术后不同时间点门静脉压力显著小于单独使用特利加压素处理组（P＜0.001）（图1）.术后在不同时间点检测各组受体大鼠ALT，结果提示各组受体大鼠ALT均在术后第4天上升到峰值，随后下降（图2），使用FK-409处理受体大鼠在术后4 d、7 d可有效降低ALT（P＜0.05）（图2）.单独使用特利加压素（P＜0.01）或使用特利加压素联合FK-409（P＜0.001）处理受体大鼠可有效在术后1 d、4 d、7 d点降低ALT（图2）.此外，使用特利加压素联合FK-409处理组在术后1 d、4 d、7 d ALT显著低于单独使用特利加压素处理组（P＜0.001）（图2）.术后在不同时间点检测各组受体大鼠总胆红素，结果提示各组受体大鼠胆红素均在术后第7天上升到峰值，随后下降（图3），使用FK-409处理受体大鼠在术后7 d、10 d可有效降低胆红素（P＜0.05）（图3）.单独使用特利加压素无法在术后有效降低受体大鼠胆红素（图3），使用特利加压素联合FK-409处理受体大鼠可有效在术后7 d、10 d降低胆红素（P＜0.05）（图3）.此外，使用特利加压素联合FK-409处理组在术后7 d、10 d胆红素显著低于单独使用特利加压素处理组（P＜0.01）（图3）.对4组受体大鼠进行术后生存率分析提示：对照组受体大鼠中位生存时间为18 d，特利加压素处理组受体大鼠中位生存时间为28 d，FK-409处理受体大鼠中位生存时间为22 d特利加压素处理组联合FK-409处理组受体大鼠中位生存时间为35 d，各组间生存时间比较P=0.0071，差异有统计学意义（图4）.术后第10天取各组受体大鼠移植肝做HE染色，结果显示，对照组、特利加压素处理组、FK-409处理组移植肝组织均有不同程度的肝细胞水肿及汇管区炎细胞浸润，特利加压素处理联合FK-409处理组移植肝组织未见明显水肿并可见清晰的中央静脉（图5）.综上所述，使用特利加压素联合FK-409在术后处理减体积肝移植受体大鼠能够有效在术后降低门静脉压力、ALT和胆红素水平并能有效延长受体存活时间，结合受体肝脏病理切片所见，使用特利加压素联合FK-409处理减体积肝移植受体大鼠能够有效保护移植肝.

2 结果

所有实验数据使用Graphpad Prism 5统计软件进行数据分析，实验组和对照组不同时间点的比较使用two-way ANOVA分析（重复测量方差分析），P＜0.05为差异有统计学意义，各组生存时间使用生存曲线图绘制并分析.

  

图1 术后门静脉压力Fig.1 Portal vein pressure after operation

 

术后5 min、10 min、20 min、40 min、60 min测门静脉压力，特利加压素联合FK-409处理组与对照组相比，门静脉压力在各时间点降低，P＜0.001，n＝4.在图中ns提示差异无统计学意义，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001（n＝4）.

  

图2 术后ALTFig.2 ALT level after operation

 

术后1 d、4 d、7 d、10 d测血ALT，特利加压素联合FK-409处理组与对照组相比，术后ALT有所降低，P＜0.001，n＝4.在图中ns提示差异无统计学意义，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001（n＝4）.

  

图3 术后总胆红素Fig.3 Total bilirubin level after operation

 

术后1 d、4 d、7 d、10 d测总胆红素，特利加压素联合FK-409处理组与对照组相比，术后总胆红素有所降低，P＜0.01，n＝4.在图中ns提示差异无统计学意义，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001（n＝4）

  

图4 术后生存率Fig.4 Survival rate after operation

 

术后每日统计各组存活组只数，使用Graphpad prism 5绘制生存曲线、计算中位生存时间.特利加压素联合FK-409处理组与对照组相比，术后中位生存时间延长，P＜0.01，n＝10.

  

图5 移植肝病理Fig.5 Pathological section of liver graft

 

术后第10天取受体肝脏做HE染色，图中比例尺为100 μm.

3 讨论

减体积肝移植使用30%体积移植肝进行移植，使用经典袖套式血管吻合方案建立进行移植，手术具体方案参照Kuriyama N等人方案[2].特利加压素于受体门静脉阻断前10 min按0.05 mg/kg剂量行阴茎背静脉注射给予特利加压素1次.FK409于供体取肝前30 min，由阴茎静脉缓慢注射FK409，2 mg/kg；受体于移植后，门静脉、肝上肝下、下腔静脉血流开放后立刻由阴茎静脉注射FK409，1 mg/kg.对照组给予等量的生理盐水注射处理.

特利加压素是一种合成的后叶加压素，在3个甘氨酸残余物被内源性蛋白酶裂解后，特利加压素能释放它的活性部分，赖氨酸加压素.因此，特利加压素有着更长的半衰期和更少的副作用[15-16].先前的研究构建监测门静脉血流动力学的大鼠肝切除模型，使用特利加压素作为干预，结果发现特利加压素能够有效调节早期肝切除后门静脉高灌注状态从而防治肝切除术后SFSS发生[17].此外一些血管活性药物如FK-409可有效调节门静脉压力减缓护移植肝损害，FK409可通过NO的促释放作用，发挥NO的抗血小板集聚和抗中性粒细胞黏附，抗肝细胞凋亡和改善肝窦微循环障碍等的作用[18-20]，减轻血管内皮细胞损伤，从而减轻很多器官缺血和缺血引起的器官水肿及组织损伤，缩小坏死面积[12].但FK-409仍缺乏在减体积肝移植模型上的运用这些药物的数据资料[21].基于这些观点，特利加压素、FK-409能否用于减体积肝移植中术后移植肝的保护还有待证实，围绕着上述这些问题，我们的研究构建了减体积大鼠肝移植模型作为载体，使用术后不同给药处理以探究潜在可行的方案以保护减体积肝移植模型中移植肝.

研究使用特利加压素联合FK-409方案进行减体积肝移植术后干预可有效降低门静脉压、ALT、胆红素，同时有效延长受体大鼠存活时间，这可能与特利加压素和FK-409两种不同作用机制药物的联合使用相关，特利加压素和FK-409联合使用可能有针对性地控制活体肝移植早期门静脉升高导致过度灌注和缺血再灌注的双重损伤相关.后续的研究将继续探究特利加压素和FK-409联合使用对减体积肝移植模型中移植肝的保护机制，为特利加压素联合FK-409使用方案提供有力的实验基础.

从《西游降魔篇》字幕看“无厘头”风格翻译——以周星驰的影视剧作为例 …………… 吴建兰 邓寒雨（2.78）

特利加压素联合FK-409可有效保护大鼠减体积肝移植中移植肝，特利加压素联合FK-409方案可能成为减体积肝移植术后SFSS防治的潜在药物处理方案.

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