宝儿康散由太子参、陈皮、芡实等14 味药组成,具有补气健脾、开胃消食、渗湿、止泻的功能[1]。用于小儿脾胃虚弱、消化不良、食欲不振、大便异常、精神困倦、睡眠不安、夜惊、夜啼等症。 本品原质量标准仅在《卫生部药品标准中药成方制剂》(第十册)中收载了芡实、山药的显微鉴别和生物碱的沉淀反应,缺少以活性成分为对照品的含量测定项。 目前采用对宝儿康散质量标准的研究仅有采用TLC 图谱检测太子参、陈皮、甘草,以及HPLC 法测定橙皮苷含量的报道[2]。 橙皮苷是宝儿康散主要活性成分之一,有关中药陈皮饮片及其制剂中橙皮苷的含量测定研究众多[3-6],池浩波等[2]测定宝儿康散中橙皮苷,由其样品色谱图可以看出前5 min 杂峰较多,基线上扬,色谱条件不佳,因此,笔者采用HPLC法测定宝儿康散中橙皮苷含量,旨在为宝儿康散的质量控制提供理论支撑。

1 仪器与试药

1.1 主要仪器

Essentia LC-15C 高效液相色谱仪,包括SPD-15C 紫外可见双波长检测器、LC-15C 送液单元、SIL-10AF 自动进样器、CTO-15C 柱温箱/储液盒均为日本Shimadzu(岛津)公司产品;XB10200D 电子天平(上海精密仪器仪表有限公司);DZF6020 真空干燥箱(南京恒群干燥设备有限公司);DK420 电热恒温水浴锅(北京成盟伟业科技有限公司);TDL-5 台式离心机(吉特实验仪器厂)。

1.2 试药

宝儿康散(广东宏兴集团股份有限公司宏兴制药厂,批号：170503),橙皮苷(中国药品生物制品检定所,批号：110721-201316)。 甲醇为色谱纯(德国Merk 公司),水为超纯水,其他试剂均为市售分析纯。 所有试剂上HPLC 前均经0.45 μm 的微孔滤膜过滤并超声脱气。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液的制备

取宝儿康散10 瓶,研细,混匀,取研细样品粉末4.0 g,精密称定,甲醇50 ml,称定重量,超声提取30 min,滤过,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,即得。

48例患者中，非梗阻20组例，占41.67%，单纯游离壁肥厚10例，占20.83%，弥漫性肥厚8例，占16.67%，单纯心尖部肥厚5例，占10.42%，室间隔肥厚为主梗阻5例，占10.42%。

2.2 对照品溶液的制备

取供试品溶液(批号：170503)在室温条件下避光放置,分别于0,2,4,8,10,12,24 h 后进样20 μl,测定峰面积值。 结果峰面积值的RSD ＝0.90%,表明供试品溶液中橙皮苷在24 h 内稳定性良好。

2.3 阴性对照液的制备

精密称取已知含量(含量为0.148 mg/片)的宝儿康散(批号为170503)30 瓶,研细,取细粉9 份,每份约2 g,分别加入橙皮苷对照品0.5024 mg,按“2.1”项下方法制备溶液,按上述色谱条件测定,平均回收率为97.9%,RSD ＝1.66%(n ＝9)。 表明本方法的回收率较好。 详见表1。

2.4 色谱条件及专属性实验

吸取橙皮苷对照品溶液,按照上述色谱条件连续进样5 次,20 μl/次,测定峰面积值。 结果橙皮苷峰面积的RSD ＝1.08%(n ＝5),表明仪器精密度良好。

  

图1 HPLC色谱图

2.5 标准曲线与线性范围

铅被人体吸收的途径主要是通过消化道和呼吸道，治疗慢性职业性铅中毒必须首先将患者脱离铅污染环境，进而使用有效的驱铅药物治疗。目前，我国临床常用的依地酸钙钠是一种氨羧络合剂，该络合物可与多种金属形成稳定的可溶性化合物，随尿液排泄，因此，依地酸钙钠可用于临床治疗某些金属中毒，包括无机铅中毒;DMSA是一种新型螯合剂，在国外常用于治疗铅中毒，其驱铅效果良好［13－14］。

精密称定橙皮苷对照12.56 mg,置100 ml 量瓶中,加甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀。 精密量取2.0,4.0,6.0,8.0,10.0 ml,置25 ml 量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀。 分别取上述溶液各20 μl,注入液相色谱仪中,在上述色谱条件下测定橙皮苷的峰面积,以对照品溶液浓度为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y),绘制标准曲线,得线性回归方程为：Y ＝67803X+24540(r ＝0.9998,n ＝5)。 结果表明,橙皮苷在10.05～50.24 μg/ml 范围内与橙皮苷峰面积呈良好的线性关系。

2.6 精密度实验

采用Waters ODS C18(4.6 mm×150 mm,5 μm)色谱柱,柱温：室温,流动相：甲醇-醋酸-水(35 ∶4 ∶60),流速：1.0 ml/min,检测波长：283 nm,进样体积20 μl,理论板数按橙皮苷峰计算应不低于2 000。按照此色谱条件,分别精密吸取供试品溶液、对照溶液和阴性对照液各20 μl,注入高效液相色谱仪中,在此色谱条件下,橙皮苷色谱峰达到基线分离,阴性样品对样品测定无干扰。 结果见图1。

2.7 稳定性实验

精密称取橙皮苷对照品12.5 mg,置100 ml 容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀;精密量取5 ml,置25 ml 量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,制成每毫升含25.0 μg 的橙皮苷对照品溶液。

本研究采用HPLC 法测定宝儿康散中橙皮苷含量。 笔者在实验过程中较详细地考查了提取溶剂和提取方法对提取得率的影响,本研究以甲醇、乙醇提取样品,在前期的实验中,分别用同一样品不同溶剂超声提取30 min后检测,甲醇的提取得率最高,而乙醇的提取得率相对较低,因而以甲醇为提取溶剂。分别采用超声提取、回流提取和索氏提取器提取30 min后检测,结果超声提取最为完全。 在探讨提取时间时,以甲醇溶媒,采用超声提取15,25,30,35,45 min,结果以超声提取30 min 提取完全,继续延长提取时间对结果影响不大,因此,本实验选定以甲醇超声提取30 min 方法进行样品提取。

2.8 重复性实验

取同批号的宝儿康散(批号：170503)5 份,每份约4 g,研细,按“2. 1” 项下平行制备供试品溶液,按上述色谱条件测定每份供试品中橙皮苷的含量。 结果橙皮苷含量的RSD ＝0.92%(n ＝5)。 表明本实验方法重现性良好。

2.9 加样回收率试验

按照宝儿康散处方制备不含陈皮药材的阴性对照样品,依照“2.1”项下方法制成阴性对照品溶液。

 

表1 橙皮苷加样回收率实验结果

  

编号 取样量(g) 样品原有量(mg) 加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%)1 2.1630 0.6402 0.5024 1.124 96.3 2 2.1633 0.6403 0.5024 1.118 95.1 3 2.1670 0.6414 0.5024 1.135 98.2 4 2.1611 0.6397 0.6280 1.249 97.0 5 2.1635 0.6404 0.6280 1.254 97.7 97.9 1.66 6 2.1669 0.6414 0.6280 1.266 99.5 7 2.1644 0.6407 0.7536 1.401 100.9 8 2.1621 0.6400 0.7536 1.377 97.8 9 2.1670 0.6414 0.7536 1.386 98.8

2.10 样品含量测定

分别取10 批不同批号(批号：160402、160810、161101、 161209、 170503、 170808、 171104、 171206、180305、180207)宝儿康散,每批分别取3 份,每份取样量约为4.0 g,按“2. 1”项下方法制备样品溶液,按上述设定的色谱条件测定样品中橙皮苷的含量,平均含量分别为0.154 mg/片,RSD ＝1.69%(n ＝10)。详见表2。

 

表2 宝儿康散中橙皮苷含量测定结果

  

类别 160402 160810 161101 161209 170503 170808 171104 171206 180305 180207取样量(g) 4.0293 4.0361 4.0465 4.0736 4.1712 4.0765 3.9991 4.2310 4.0721 4.0293样品含量(mg/瓶) 0.148 0.157 0.156 0.152 0.153 0.154 0.156 0.154 0.153 0.152

3 讨论

高校图书馆创业发展模式与协作构建模式相结合。创业发展模式主要是各专业的师生共同参与，互相商讨与切磋，各展所长，共同进行产品研发，促进创业萌芽，将idea变成现实。同时，随着创客空间的发展，鉴于协作构建模式的优势，该种模式在高校图书馆创客空间的构建上，也逐渐采用。

在实验过程中对色谱条件进行了考查。 参考《中国药典》2015 年版一部中陈皮含量方法[7]和参考文献[8-9],主要考察了流动相的组成比例对橙皮苷分离测定的影响。 考察了甲醇-醋酸-水(15∶4∶70;25 ∶4 ∶70;35 ∶4 ∶60)的比例,结果采用甲醇-醋酸-水(35 ∶4 ∶60)橙皮苷峰能达到基线分离,保留时间为5.02 min 左右,橙皮苷出峰时间合适,分离效果比其他流动相好。 同时笔者还对测定条件进行了方法学考察,本实验的精密度、稳定性和重复性好,加样回收率在可控范围内。

3)调节水资源极差收入，保障水电机组公平竞争，进一步放开发电侧进入市场。云南省内机组水电机组资源差异大、开发时间不同、调节能力不同，导致水电机组上网电价差异很大。目前云南的市场出清办法为价差对模式，主要原因是水电机组价格差异大，水电机组边际成本又低，如果采用统一出清的方式，出清价格会非常低，严重损害发电企业利益。当前平衡不同机组之间上网电价差异大的方式主要通过政府分配进行平衡。通过政府主导来平衡利益的方法在市场建设之初有助于平衡利益，但长期会损害市场主体的能动性，不利于形成良好的市场秩序。

总之,本研究优选出宝儿康散中橙皮苷的最佳提取方法和色谱分离条件,建立了采用HPLC 测定宝儿康散中橙皮苷含量的方法,该法重现性好、结果稳定、简便可行,适用于宝儿康散中橙皮苷的质量控制,也为全面研究宝儿康散的质量标准提供了参考。从本实验结果来看,建议宝儿康散中橙皮苷含量不应低于0.140 mg/片。

Compound 1 amorphous powder; [α]D25 −10.4 (c 0.12, CHCl3); IR (KBr) νmax = 3414, 2927, 1718, 1245, 1054, 770 cm–1;1H- and 13C NMR (CDCl3), see Table 1; HR-ESI-MS m/z 683.3198 [M + Na]+ (Calcd. for C39H48O9Na, 683.3196).

参考文献：

[1] 张丽学.宝儿康散治疗脾虚困型小儿腹泻的临床疗效观察[J]. 中国中药杂志,2015,40(8)：1605-1609.

[2] 池浩波,张雪原,林晓辉,等.宝儿康散质量标准修订研究[J]. 中国药品标准,2008,9(5)：334-338.

[3] 孙全,徐冲,刘霞,等. HPLC 同时测定川佛手中的橙皮苷与5,7-二甲氧基香豆素[J]. 华西药学杂志,2017(6)：646-648.

[4] 翟宏宇,王海洋,杨献玲,等. 保心宁片HPLC 特征图谱研究及8 个指标性成分的含量测定[J]. 药物分析杂志,2017(9)：1633-1639.

[5] 陈小玲,蔺红伟,江春霞,等. 高效液相色谱法测定白龙解郁颗粒中橙皮苷和甘草苷的含量[J]. 第二军医大学学报,2017(9)：1202-1205.

[6] 宋玉鹏,陈海芳,谭舒舒,等. 不同陈皮来源药材中橙皮苷、川陈皮素、橘皮素和辛弗林的含量比较[J]. 时珍国医国药,2017(9)：2061-2064.

[7] 国家药典委员会.中国药典2015 年版.一部[S].北京：中国医药科技出版社,2015：191.

[8] 邓双炳,王成霞,胡玉花,等. HPLC 测定小儿参术健脾丸中橙皮苷的含量[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(1)：59.

[9] 冼少华,张伟强,吴智南.HPLC 法测定参田胶囊中橙皮苷的含量[J]. 西北药学杂志,2011,26(1)：12.