肾嫌色细胞癌首次于1985年被Thoenes[1]等报道，是肾细胞癌中相对少见且预后较好的一类肿瘤。不同亚型的肾细胞癌具有独特的病理特征，且预后相关因素也有所差异。国内针对肾嫌色细胞癌预后因素的研究较少，本研究通过对肾嫌色细胞癌的免疫组化特点的探讨，以提高肾嫌色细胞癌的诊治水平。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集郑州大学第一附属医院2011-09—2016-09间收治的127例病理确诊为肾嫌色细胞癌患者的病理资料，分析其免疫组化特点。其中男60例，女67例；年龄24～87岁，平均51.65岁。肿瘤直径: 96例<7 cm，31例≥7 cm。肿瘤分期：pT1期 73.2%(93/127)， T2期19.7%(25/127)，pT3期4.7%(6/127)，pT4期2.4%(3/127)。根治性切除97例，部分切除30例。

1.2 方法 标本经4 %甲醛固定, 常规脱水, 石蜡包埋, 4 μm厚切片, 常规HE 染色, 光镜观察。所用抗体S-100，CK,CK7，CD10，CD117，PAX-2，PAX-8，Vim,EMA,RCC,Ki-67, E-caderin均购自北京中杉金桥生物技术有限公司, 采用EnVision 二步法进行免疫组化标记。

1.3 结果判定 用半定量计数方法在高倍镜下随机选取10个有代表性的视野, 计数阳性细胞数。细胞阳性率=(阳性瘤细胞数/总瘤细胞数)×100%。细胞阳性率<10%为(-), >10 %为(+)，细胞阳性率10%-90%为(+/-)，NDA为无数据可用。

2 结果

本组127例嫌色细胞癌患者免疫组化的统计结果见表1。

3.1 流行病学及临床特征 肾嫌色细胞癌是肾癌的新的组织学分型，它占同期所有肾癌的5%，本组为4.9(127/2592)，与之相当。肾嫌色细胞癌的预后优于其他类型的肾癌，它的5a和10a无病生存(DFS)分别为83.9%和77.9%[2]。肾嫌色细胞癌无明显临床表现，大多在体检时偶然发现，少数患者可表现为无痛性肉眼血尿、腰背部疼痛。典型的三联征腰部疼痛、血尿及腰部肿块已少见，三联征的出现常常预示着更严重的病变，故常常通过术后病理诊断[3]。

 

表1 127例嫌色细胞癌患者免疫组化的统计

  

免疫组化反应结果不同的免疫组化标记物S-100CKCK7CD10CD117PAX-2PAX-8VimEMARCCKi-67E-caderin+21056824771253161005080+/-96162828182610317614-872245767917771761056NAD101520181721322120302626

3 讨论

“苗优”就是在人员招聘时，注重人员的专业背景、道德品质、价值观和个人发展潜力，尤其重视人才队伍的年轻化。他们相信年轻员工更具有创造力。“土肥”就是让员工能够最快、最有效地了解公司的各种业务，通过高流动性，吐故纳新。

综上所述，在临床上对糖尿病患者进行生化检验方法进行诊断，其效果较好，并在一定程度上提升了临床检验结果的有效率，为医生后期对病患进行临床治疗提供有效准确的数据支持，值得在临床上进行广泛的应用和推广。

3.3.5 Caveolin-1 Caveolin-1是一种脚手架蛋白质，具有重要作用细胞功能，包括运输胆固醇和糖鞘脂，螯合和组织许多信号分子，并调节一些激酶活性。Ediberto[15]等的研究对比了21例嫌色细胞癌及26例嗜酸性细胞瘤中Caveolin-1表达情况。结果发现所有21例嫌色细胞癌均为阳性，且其中20例阳性染色肿瘤细胞达20%以上。这与嗜酸性细胞瘤形成鲜明对比，其中23例(88%)为阴性，3例显示染色不到20%的肿瘤细胞。Tamaskar [16]等的研究也发现Caveolin-1在 16例嗜酸性细胞瘤中均表达阴性。因此染色20%以上的肿瘤细胞，强烈支持嫌色细胞癌诊断；阴性染色强烈提示拒绝该诊断。相比之下，CK7显示出更少的区别模式。嫌色细胞癌和嗜酸性细胞瘤分别为86%和27%在20%以上的肿瘤细胞中呈现阳性染色。因此相比于CK7，Caveolin-1更有利于嫌色细胞癌与嗜酸性细胞瘤的鉴别诊断。

 

表2 为Marina O. Golovastova[6]等 对不同肾细胞癌亚型的免疫组化分析的汇总

  

肾细胞癌亚型不同的分子标志物阳性阴性透明细胞癌Recoverin,vimentin,AE1/AE3keratins,EMA,CK18,CD10,RCCmark-er,caveolin-1,S100,PAX2,PAX8,CAIXC-kit,kds-cadherin,E-cadherin,parvalbumin,CK7,CK19,CK20,AMACR肾乳头状癌Recoverin,vimentin,AE1/AE3keratins,CK7,S100,C-kit,kds-cad-herin,parvalbuminEMA,CD10,AMACR,andRCCmarkerC-kit,kds-cadherin,parvalbumin肾嫌色细胞癌Recoverin,kds-cadherin,E-cadherin,caveolin-1,vimentin,CAIX,CD15,S100,PAX2,RCCmarker,AMACRparvalbumin,C-kit,EMA,AE1/AE3keratin,CD15andCK7vimentin,CAIX,CD15,S100,PAX2RCCmarker,AMACR嗜酸性细胞瘤Recoverin,AE1/AE3keratinparvalbumin,S100A1,AMACR,CAIX,RCC-marker,vimentinandcaveolin-1C-kit,caveolin-1,E-cadherinandkid-ney-specificcadherin,PAX2,PAX8,EMA,galectin-3,CD15,BCA2AMACR,CAIX,RCCmarker,vimentinandcaveolin-1C

3.3.6 Vimentin Vimentin是一种中间丝蛋白，是真核细胞中的重要结构成分，其与微管及肌动蛋白微细丝，共同构成细胞骨架。Vimentin亦参与细胞内物质传输的调控 。Singh等利用 LNCaP细胞被稳定转染以表达波形蛋白，并用波形蛋白反义构建体转染CL1细胞。使用体外侵袭试验测试转染细胞的侵袭性。证明在组成型波形蛋白表达的CL1细胞中波形蛋白表达降低导致其侵袭性的显着降低，但是在LNCaP细胞中强制波形蛋白的表达没有增加其侵袭性。这些发现意味着波形蛋白表达有助于侵入性表型，但不能单独赋予它[17]。而Zhao W等的通过比较肾透明细胞癌、嫌色细胞癌及嗜酸性细胞瘤这三种较易混淆的肾癌类型，结果提示Vimentin在嫌色细胞癌中表达阴性(0/32),而在透明细胞癌及嗜酸性细胞瘤中均有表达，阳性结果分别为86.7%(26/30)、81.0%(17/21)。可见vimentin表达阴性可用于该三种肾癌类型的鉴别诊断[18]。综上所述，vimentin并不能用于嫌色细胞癌的诊断，但阴性结果可用于鉴别诊断。

3.3.2 Claudin-7 在正常的胎儿和成年肾脏中，Claudin-7(紧密连接蛋白-7)免疫反应性限于远端小管和集合管。Yoo Duk Choi[9]等人对239例肾癌研究中发现，Claudin-7(紧密连接蛋白-7)和分别在3.4%肾透明细胞癌、34.5%的肾乳头状细胞癌、95.0%的肾嫌色细胞癌和72.7%的肾细胞瘤中为阳性，Claudin-7在诊断肾嫌色细胞癌中的敏感性和特异性分别为95.0%和92.3%。Lechpammer M[21]等人对114例肾癌研究发现中度至强的Claudin-7在肾嫌色细胞癌(94%)中的表达明显多于嗜酸性细胞瘤(55%，P=0.041)的表达。综上，Claudin-7可以用作诊断肾嫌色细胞癌和嗜酸性细胞瘤有价值的诊断标记。

3.3.1 KAI1蛋白 KAI1蛋白(CD82;转移抑制蛋白)是由位于染色体11p11.2上的KAI1基因编码的表面糖蛋白。这是一种转移抑制蛋白，CD82在启动子区域具有推定的p53结合基序，因此已经表明p53可以直接调控CD82的表达，其表达与p53蛋白的表达密切相关。 Kauffman[7]等人通过对152例肾切标本分析发现仅2%(2/28)的嗜酸性细胞瘤表达KAI，但却有87%(27/31)的肾嫌色细胞癌中表达KIA。因此认为KAI1是肾嫌色细胞癌亚型的敏感和特异性标记，这可能有助于从嗜酸性粒细胞瘤中诊断肾嫌色细胞癌。Maria V Yusenko [8]等发现CD82/KIA 1在78%(69/88)的肾嫌色细胞癌中表达，仅有3%的肾透明细胞癌(6/220)，而在嗜酸性细胞瘤(0/90)或乳头状肾癌(0/171)中没有表达。因此认为CD82/KIA 1是恶性肾嫌色细胞癌和具有重叠表型的良性嗜酸性细胞瘤的免疫组织化学鉴定诊断的优秀标记物。

3.3.3 S-100家族 S100被证明作为肿瘤抑制因子或启动子起作用，因为它可以影响癌细胞的增殖，并且在影响癌细胞增殖方面发挥各自的作用。Fan Lin[11]等用Western blotting证实肾细胞肿瘤和正常肾组织中的S-100蛋白表达，其研究发现在81例肾透明细胞癌(RCCs)中的56例(69%)、33例乳头状癌患者中有10例(30%)、16例肾嫌色细胞癌中的1例(6%)及15例嗜酸性细胞瘤中的13例(87%)有S-100蛋白的细胞核和细胞质染色模式。这表明S-100具有诊断价值，可以将嗜酸性细胞瘤和肾嫌色细胞癌区分开来。G Li[12]等人报道，以前诊断为嗜酸性细胞瘤的93%(14/15)的病变显示S100A1蛋白表达，而9例肾嫌色细胞癌标本中都没有显示S100A1蛋白阳性反应。此研究结果与我院统计结果类似，我院127例有记录的免疫组化中亦未发现S-100阳性的结果，这提示S-100A1的阴性表现预示着肾嫌色细胞癌可能预后较好，而且可作为与嗜酸性细胞瘤区分的特异性分子标志物。

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3.2 分子标记 分子学机制上，Williamson[4]等人在全世界发起一项鉴别嗜酸性细胞瘤和肾嫌色细胞癌的泌尿病理学家调查问卷。回馈提示目前最常用的染色技术包括：CK7(94%)，KIT(71%)，波形蛋白(65%)，胶体铁(59%)，CD10(53%)和AMACR(41%)。罕见的CK7阳性细胞(≤5%)被认为是最有力的支持，多发性染色体缺失色体最支持肾嫌色细胞癌的诊断(65%)。Jason C Carvalho[5]等发现CK7表达在区分嗜酸性细胞瘤和肾嫌色细胞癌中都是敏感的和特异性的(分别为89%和86%)，在肾嫌色细胞癌中缺乏S100A1的反应性能够排除嗜酸性细胞瘤，其显示弱至强染色，较高的灵敏度为94%，特异性为95%；结合使用，以CK7和S100A1分离嗜酸性细胞瘤和肾嫌色细胞癌分别具有91%和93%的灵敏度和特异性，与嗜酸性细胞瘤相比，肾嫌色细胞癌中缺乏S100A1的表达。Marina O.Golovastova[6]等对不同肾细胞癌亚型的免疫组化分析的汇总见表2。

3.3 免疫标志物特征

3.3.7 Parvalbumin Parvalbumin是调节细胞溶质钙稳态的钙结合蛋白。在肾脏中白蛋白限于远端肾小管和收集管细胞，其发生在控制肾脏的钙通量。Parvalbumin在大多数嫌色RCC和嗜酸性细胞瘤中强烈表达，但在其他类型的RCC中基本上是阴性的。 这种有限的表达有助于其鉴别诊断[19]。Maurizio [20]等的研究也提示证据表明CK7和小白蛋白免疫染色可能有助于在有问题的病例中分化嗜铬细胞瘤与嫌色RCC。 综上所述，Parvalbumin是由嫌色肾细胞癌中特征表达，其阴性结果可用于该肿瘤的鉴别诊断。

3.3.4 CK7 CK7是一种组织碱性角蛋白，存在于大多数组织的腺上皮和移行上皮细胞中，一般非上皮来源的细胞无表达。Skinnider B [13]等认为肾嫌色细胞癌通常是CK7+、CK8+、CK18+和Vim-，并且可以与嗜酸性细胞瘤(通常CK7-)区分开来。Mathers ME[14]等研究发现18例肾透明细胞癌中有17例表现为CK 7阴性，仅1例为5%以下弱细胞染色，10例嗜酸性细胞瘤的显示斑片状弱到中度的细胞质表达CK7，但和肾嫌色细胞癌相比，没有外周膜染色加重的特征性表现。因此认为可以用CK来区分嗜酸性细胞瘤，也可以用来区分嗜酸性细胞瘤和肾透明细胞癌。我院统计的肾嫌色细胞癌CK7阳性率为77.8%(84/108)，提示对肾嫌色细胞癌的诊断具有一定的提示作用。

3.3.8 上皮膜抗原(EMA) EMA是一种糖蛋白，在大多数研究中称为MUC1。其不仅是重要的诊断标记，而且在肿瘤细胞免疫逃逸中起作用。在肾细胞癌中，EMA是恒定存在的免疫组织化学诊断面板，正常情况下常规肾癌表达阳性，它是区分来自其他腹膜后肿瘤的肾细胞癌，例如腹膜后副神经节瘤和肾上腺癌的有用标记[21]。Enriquez[22]等EMA在肾透明细胞、乳头状、嫌色肾细胞癌和嗜酸性细胞瘤中阳性染色率分别为85%、95%、100%和95%。 EMA在肾上腺癌中是完全阴性的。因此在困难的情况下， EMA可能有助于肾上腺肿瘤与肾肿瘤的鉴别。

3.3.9 染色体 越来越多的研究表明肾嫌色细胞癌的发生发展和染色体的异常密切相关。G. Steiner[23]等认为3p、 5q、 17p及17q21的缺失和肾嫌色细胞癌的发生密切相关，1号和2号染色体联合缺失被认为是肾嫌色细胞癌所特有的。频繁的2、6和10染色体的缺失是肾嫌色细胞癌的一个特征，而嗜酸性细胞瘤显示6号和10号染色体的非常频繁的缺失，并且没有2号染色体的缺失。Mari[24]等发现整个染色体2、10、13、17和21缺失仅发生在肾嫌色细胞癌中，因此定位在这些染色体上的探针可能被用于确定组织学不确定的情况下肾嫌色细胞癌的诊断。Brunelli M[25]等发现染色体1、2、6、10和17上多个片段的增多对于肾嫌色细胞癌的肉瘤样转化是重要的，但对其转移潜能不重要。总之，使用特异性检测染色体着丝粒的FISH探针的有效性未通过大规模的研究所证实，因此，不能被用作主要方法，而只能在鉴别肾嫌色细胞癌和嗜酸性肿瘤的诊断中发挥支持作用。

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综上所述，肾嫌色细胞癌的免疫组化常表现为：CK(+),CK7(+),CD10(+),EMA(+)，AMACR(+)，E-caderin(+)，Vim(-)，S-100(-)。且以上免疫标志物中KAI1及Claudin-7阳性，S-100A1的阴性表现是诊断肾嫌色细胞癌亚型的敏感和特异性标记，且可用于与嫌色细胞癌较难区分的嗜酸性细胞瘤的鉴别。而S-100A1的阴性表现还预示着肾嫌色细胞癌可能预后较好。Parvalbumin在大多数嫌色RCC和嗜酸性细胞瘤中强烈表达，但在其他类型的RCC中基本上是阴性的，可用于该两种肿瘤的鉴别。而EMA可能有助于肾上腺肿瘤与肾肿瘤的鉴别。染色体的检查还可用于鉴别常规检查难以鉴别的肾嫌色细胞癌和嗜酸性肿瘤。CD117在肾嫌色细胞癌的细胞膜上的过表达可能是激酶抑制剂的潜在靶标，如伊马替尼、达沙替尼、尼罗替尼，肾嫌色细胞癌中其他激酶抑制剂(舒尼替尼和索拉非尼)的潜在靶标似乎是VEGFR和PDGFR[26]。Dimitrious Zardavas[27]等发现对于远处转移的肾嫌色细胞癌在酪氨酸激酶抑制剂给药失败后，可以用西替他莫司(mTOR抑制剂)治疗。其研究表明，对酪氨酸激酶抑制剂耐受后使用西替他莫司，肿瘤在14个月内得到部分缓解，并且肿瘤对药物的反应仍在继续。

采用统计学软件SPSS14.0进行统计学分析,率的比较采用卡方检验,P<0.05,显示差异有统计学意义。

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