白芍为毛茛科植物芍药(Paeonia lactiflora Pall)的干燥根，具有平抑肝阳、养血调经、敛阴止汗、抗菌之功效[1-3]。桂枝为樟科植物肉桂(Cinnamomum cassia Presl)的干燥嫩枝，具有发汗解肌、温通经脉、助阳化气、平冲降气之功效[4-5]。白芍、桂枝配伍早在张仲景《伤寒论》即有记载，曰桂枝汤，具有调和营卫，缓中和里的作用[6-8]。目前研究最多的还是关于白芍、桂枝单个药材的提取工艺优化，而且多采用单一成分作为考察指标，而两者经过相互配伍是否使有效成分发生了变化，有必要对桂枝与白芍的配伍进行研究，但提取工艺到底以何种为佳，尚无定论。本实验通过对白芍、桂枝药对不同比例配伍进行不同时间的煎煮，提取液通过高效液相色谱法进行梯度洗脱，工艺进行综合比较，再进行优选，为白芍、桂枝配伍中芍药苷、桂皮醛的提取提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)；高效液相色谱仪 (日本岛津)；Milli-Q一体式超纯水机(美国Milipore公司)；KQ-100DA型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；旋转蒸发仪R-1001N(郑州长城科工贸有限公司)；DZF-6050型真空干燥箱(上海博讯实业有限公司医疗设备厂)。

其中， t是迭代次数; w为惯性权值;r1，r2为介于[0，1]的随机数以保持群体的多样性;c1，c2为加速因子，表示粒子向自身或群体学习的能力．

1.2 试药 白芍药材(产地安徽亳州)；芍药苷对照品(批号:110736-201539，含量98%，中国食品药品检定研究院)；桂枝药材购自安徽益生源中药饮片科技有限公司(批号：141101)；桂皮醛对照品(批号：110774-200507)；桂皮醇对照品(批号：C110605)；桂皮酸对照品(批号:C108497)；乙腈为色谱级；甲醇色谱级；水为超纯水；其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 HPLC含量测定方法

新时代,我国把“美丽”作为建设现代化强国必须达到的目标。党的十八大把生态文明建设纳入“五位一体”总布局,“美丽中国”成为中华民族追求的新目标;中国共产党更是第一个将生态文明建设写入行动纲领的执政党;十八届五中全会,将绿色发展纳入新发展理念;十九大报告提到“美丽”8次,“生态文明”多达12次,“绿色”15次,首次提出要把我国建成富强民主文明和谐美丽的社会主义现代化强国,强调我们要建设的现代化是美丽的;全国生态环境保护大会上首次提出“构建生态文明体系”,其中就包括“以产业生态化和生态产业化为主体的生态经济体系”;强调“绿色发展是构建高质量现代化经济体系的必然要求,是解决污染问题的根本之策”。

2.2 白芍-桂枝的提取工艺 按照白芍与桂枝1:1、2:1、3:1的配伍比例，总质量为22g，加70%乙醇浸泡0.5 h，用70%乙醇加热回流2次，第1次用8倍量乙醇，第2次用6倍量乙醇，按1h-1h，0.5h-0.5h(前者为第一次提取时间，后者为第二次)提取时间进行提取，分别滤过，合并两次滤液，60℃下进行减压旋蒸回收乙醇，浓缩至50mL。分别精密吸收对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定，即得。分别计算芍药苷，桂皮醛转移率，结果见表1。

2.1.6 精密度考察 按“2.1.1”项下制备对照品溶液，分别精密吸取芍药苷、桂皮醛对照品溶液20μL，按“2.1.4”项下所述色谱条件分别连续进样6次，每次20μL，分别计算芍药苷与桂皮醛色谱峰峰面积的RSD值为1.89、1.87,结果表明：芍药苷与桂皮醛色谱峰的保留时间和峰面积没有明显变化,该方法精密度良好。

维生素C（抗坏血酸）：为白色结晶性粉末，无臭，味酸，久置色渐变黄。维生素C参与体内多种代谢，如参与叶酸代谢，刺激造血机能；促进铁剂吸收，对血红蛋白和红细胞的成熟有影响，参与胶原纤维的合成，加速创口的愈合，促进机体内抗体形成，增强白细胞吞噬作用，增加机体抗感染能力。

2.1.5 线性关系考察 吸取芍药苷对照品溶液适量，分别置于10mL量瓶中，加入甲醇稀释，摇匀，依次配制成浓度为30、60、90、120、150μg/mL的溶液。分别吸取上述溶液适量，过0.45μm的微孔滤膜，按“2.1.4”项下的色谱条件，分别进样20μL，测定芍药苷峰面积。以芍药苷的浓度(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程：Y=21893X-172373，r=0.9996。实验结果可表明，芍药苷在30μg/mL～150μg/mL的含量范围内与其色谱峰面积的线性关系良好。吸取桂皮醛对照品溶液，分别置于10mL量瓶中，加入甲醇稀释，摇匀，依次配制成浓度为60、90、180、270、360μg/mL的溶液。分别吸取上述溶液适量，过0.45μm的微孔滤膜，按“2.1.1.4”项下的色谱条件，分别进样20μL，测定桂皮醛峰面积。以桂皮醛的浓度(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程：Y=30713X-16436，r= 0.9998。实验结果表明桂皮醛在，60～360μg/mL范围内线性关系良好。

  

图1 (1代表芍药苷，2代表桂皮醛)

2.1.4 色谱条件 色谱柱:Luna C18(250mm×4.6mm,5μm)；柱温:30℃；检测波长:254nm；流速:1.0mL·min-1；流动相:乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)梯度洗脱，洗脱条件:0min，10%A；10min，15%A；20min，20%A；30min，25%A；40min，30%A；50min，40%A，65min,100%A。在此条件下，结果芍药苷、桂皮醛与其他组分均能较好地达到基线分离，表明样品中其他成分对于两者的测定无干扰。色谱图见图1。

2.1.2 提取工艺 分别取适量药材饮片，加10倍量70%乙醇，浸泡30min，滤过，量取滤液体积，计算吸水率为252.53%(n=3)，即药材至少需要加2.5倍量的70%乙醇才能被浸润。按照白芍与桂枝1:1、2:1、3:1的配伍比例，总质量为22g，精密称定，置于250mL圆底烧瓶中，加70%乙醇浸泡0.5h，用70%乙醇加热回流2次，第1次用8倍量乙醇，第2次用6倍量乙醇，按1h～1h，0.5h～0.5h(前者为第一次提取时间，后者为第二次)提取时间进行提取，分别滤过，合并两次滤液，60℃下进行减压旋蒸回收乙醇，浓缩至50mL。即得所需中药提取液。

2.1.9 加样回收率试验 取同一批经过测定已知含量的供试品溶液适量，分别加入浓度约为供试品60%、90%、120%的芍药苷与桂皮醛对照品溶液振荡混合均匀，按照“2.1.4”所述色谱条件测定含量，分别计算得芍药苷的平均回收率为99.17% ，98.00%，RSD值分别为1.34，0.95，结果表明该方法可行。方法学实验表明本文建立的白芍与桂枝配伍HPLC梯度洗脱分析方法精密度、稳定性、重复性、加样回收率试验结果均符合相关要求，是稳定可靠的含量分析方法。

2.1.8 重复性考察 按“2.1.3”项下制备供试品溶液，取同一批次样品6份，按“2.1.4”项下所述色谱条件分别进样分析，每次20μL，分别计算芍药苷与桂皮醛色谱峰峰面积的RSD值为1.73、1.66，结果表明该方法重复性良好。

2.1.7 稳定性考察 按“2.1.3”项下制备供试品溶液，精密吸取同一批号的供试品，按“2.1.4”项下所述色谱条件在0、2、4、8、12、24h分别进样进行分析，每次20μL，分别计算芍药苷与桂皮醛色谱峰峰面积的RSD值为2.52、1.94，结果表明该方法稳定性良好。

2.1.1 对照品溶液的制备 取芍药苷对照品约0.0020g，精密称定，置于10mL的容量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻度，即得。取桂皮醛对照品约0.0029g，精密称定，置于10mL的容量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻度，即得。

由表1中芍药苷转移率与桂皮醛转移率分析，结果表明以芍药苷的转移率为指标时，在相同提取时间下，配伍比2:1与3:1转移率结果相接近，且优于1:1；在相同配伍比下，芍药苷提取1h的转移率明显高于0.5h。以桂皮醛的转移率为指标时，在相同提取时间下，配伍比3:1的转移率明显优于2:1和1:1；在相同配伍比下，桂皮醛提取1h的转移率明显高于0.5h。因此我们选择提取配伍比为3:1，提取时间煎煮1h为最佳提取方法。

2.1.3 供试品溶液制备 精密吸取“2.1.2”项下不同提取工艺条件下制备的中药提取液1mL于蒸发皿中，水浴进行挥干，剩余物加甲醇溶解，移入2mL容量瓶中，定容至刻度线，用0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得。

五矿铜业电解投产状况良好，首批阴极铜就可以在阴极剥片机组成功剥离，未出现酥脆和分层等现象，铜含量达到99.998%，物理性能良好，但是外观质量不佳，表面密布扎手铜粒子。

 

表1 芍药苷、桂皮醛转移率(n=3)

  

煎煮时间配伍比芍药苷转移率(%) 转移率(%)桂皮醛转移率(%)转移率(%)0.5h1:153.54 52.13 53.6753.11±1.6117.0917.6317.2417.32±1.612:158.6957.1858.0757.98±1.3123.2624.1323.7323.74±1.623:158.7957.8559.9958.88±1.8238.8938.3639.2538.83±1.151h1:171.2170.3969.3670.32±1.3223.1224.0123.7623.63±1.942:179.1078.1379.8879.04±1.1130.5830.8931.3330.93±1.223:178.3777.7979.7378.63±1.2760.8959.3759.2959.85±1.51

2.3 工艺验证试验 按2.1.2项下工艺条件，白芍桂枝配伍比3:1，煎煮时间1h，煎煮2次，再制备3批供试品，按2.1.4项下方法进行梯度洗脱，见图2：

(2)拓展话语空间。成为“人物符号”的专家尚属少数，但在互联网时代，更多的非官方专家学者通过微博、博客、微信等自媒体平台，自发主动地宣传自身政策主张，极大拓展了话语空间。如吉林独立人口研究者杨子实，其微博粉丝数达13 878人，共发布13 945条微博，有一定的转赞评量；关注人口问题的专栏作家何亚福从2010年末开始在微博上探讨人口问题，始终支持放开生育，现微博粉丝近4万。[注]数据截至2017年4月6日。 这些“草根”学者尽管无法直接向决策者提交政策议案，但通过新媒体平台产生了不可忽视的社会影响力。

  

图2 (1代表芍药苷，2代表桂皮醛)

验证结果表明，白芍与桂枝配伍供试品中芍药苷的转移率为(78.74±1.33)%，桂皮醛的转移率为(60.07±1.48)%，与表1中白芍桂枝配伍比3:1，煎煮时间为1h提取的供试品中芍药苷转移率与桂皮醛转移率数据相接近，表明配伍比3:1，煎煮时间为1h的提取方法为最佳。

3 讨论

目前只有关于白芍、桂枝单个药材的提取工艺优化，而且多采用单一成分作为考察指标，而两者经过相互配伍是否使有效成分发生了变化，这方面的报道很少，因此我们有必要对桂枝与白芍的配伍提取进行研究。本实验研究结果表明，芍药苷、桂皮醛与其他组分分离较好；结果表明以芍药苷的转移率为指标时，在相同提取时间下，配伍比2:1与3:1转移率结果相接近，且优于1:1；在相同配伍比下，芍药苷提取1h的转移率明显高于0.5h。以桂皮醛的转移率为指标时，在相同提取时间下，配伍比3:1的转移率明显优于2:1和1:1；在相同配伍比下，桂皮醛提取1h的转移率明显高于0.5h。同时考虑多方面因素，认为白芍与桂枝配伍比3:1，煎煮时间1h为最佳提取工艺。白芍在提取过程中芍药苷由于受热可能会被破坏，含量往往下降，可能是因芍药苷的水解所致，因此白芍在提取过程中应尽量避免长期高温受热[9]。提取过程中发现因桂枝饮片质轻易浮于水面上，因此浸泡过程中需不断搅拌，使药材组织细胞充分膨胀后恢复其天然状态，提取时易于有效成分的浸出，且桂皮醛属于桂枝中的挥发油成分，其易挥发且遇光、热不稳定特性，我们采取乙醇回流提取法进行提取，控制提取温度及提取时间，保证了芍药苷以及桂皮醛的提取不会受到损失，因此在不影响两者得率的情况下，我们选择煎煮时间1h作为提取工艺的最佳时间，温度控制在微沸状态以此来有效提高提取效率。试验结果表明，白芍与桂枝配伍中芍药苷、桂皮醛的提取以3:1作为配伍比，煎煮时间1h为最佳提取工艺，为两种药材配伍提取工艺的研究提供了一定依据。

参考文献

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[2] 李兰城.白芍中芍药苷的提取工艺[J].北方药学，2014，(02):59-60.

[3] 阎星如,李英杰,田杰.白芍中芍药苷的提取工艺研究[J].齐齐哈尔大学学报(自然科学版)，2014,(01):62-63.

[4] 许源,宿树兰,王团结,等.桂枝的化学成分与药理活性研究进展[J].中药材,2013,(04):674-678.

[5] 袁鹏飞,尚明英,蔡少青.桂枝、肉桂化学成分指纹图谱研究[J].中国中药杂志,2012,(19):2917-2921.

[6] 陈永财,王彬辉,林君.正交试验优选“桂枝与白芍”药对煎煮工艺[J].实用药物与临床,2016,(12):1530-1534.

[7] 刘静,傅杰,丁舸.桂枝、白芍核心药对在方剂配伍中的意义[J].中医研究,2012,(05):1-3.

[8] 闫玉军.桂枝、白芍药对不同比例配伍提取物指纹图谱研究[J].辽宁中医药大学学报,2014,(12):58-60.

[9] 于定荣,顾雪竹,张村,等.白芍中芍药苷提取工艺的对比研究[J].中国实验方剂学杂志,2013,(15):49-51.