目前，肥胖已成全球流行趋势，我国肥胖人口及其增长率已位居世界第一[1]。据流行病学调查认为，肥胖与Ⅱ型糖尿病、心脑血管疾病以及癌症的发生有密切的关系[2]。然而目前还没有非常有效的临床药物用于肥胖症的治疗，更多的依赖于饮食控制及运动[3-4]。体内外研究发现，高血脂能够诱导心肌细胞肥大、结构性重排、程序性凋亡等，并认为其是导致心衰的重要风险因素[5-6]。机制研究显示，高血脂通过增加心肌细胞氧化应激反应，破坏正常的能量代谢平衡，激活Caspase依赖的细胞程序性凋亡信号通路而介导心肌细胞的肥大和凋亡[7]。

雷公藤红素(Cel)是雷公藤抽提物中第一个被分离鉴定的单体化合物，早期体内外药理学研究显示其具有较好的抗炎症及抗癌效果，特别是在糖尿病肾病，神经退行性病变等动物疾病模型中显示了较好的治疗潜能[8-9]。近些年已有多篇报道显示，低剂量雷公藤红素(nmol/L级)在慢性炎症疾病、糖尿病及糖尿病肾病、肥胖症等动物疾病模型中也显示出较好的治疗潜能，如减肥，改善糖代谢，增加Leptin敏感性等，具有较好的临床应用开发价值[9-11]。

以年为单位，对某生产设备2000年到2009年采购影响因素的相关数据进行搜集整理，结果见表1。以前9年的数据作为训练样本，以第10年（2009年）的数据作为测试样本，应用基于支持向量机的生产设备采购模型进行采购量预测。

但是，雷公藤红素也具有一定的毒副作用，如杀精、心脏毒性作用等[12]。文献报道，雷公藤红素能引起斑马鱼胚胎出现心脏薄膜出血、心脏线性化，EC50(24 h)约为1.78μmol/L[10]。Wang等报道[13]，雷公藤红素在超过1 μmol/L浓度的情况下，明显影响原代大鼠心肌细胞形态的变化。在雷公藤红素浓度低于1 μmol/L时对心肌细胞的活力没有明显影响，但是可以显著影响心肌细胞电生理活动。

综上所述，低剂量雷公藤红素(小于1 μmol/L)对脂代谢混乱、炎症反应都具有较好的治疗潜能。然而，有关雷公藤红素的毒副作用目前还没有清楚的认识。本实验将以饱和脂肪酸(棕榈酸)诱导心肌细胞(H9C2)凋亡作为模型，评价雷公藤红素和高脂诱导心肌细胞凋亡的协同毒性作用及其可能的机制。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

参考文献：

1.2 方法

发放调查问卷，了解两班学生对教学方法、教学内容、教学效果、学习兴趣和团队协作能力培养的态度，非常满意为5分，较满意为4分，满意为3分，不太满意为2分，不满意为1分。

用户可以在引闪器上远程调整闪光灯的输出，这款引闪器的LCD屏幕同样拥有背光，操作逻辑也非常简单易用。Viper TTL最多支持三组闪光灯同时引闪。虽然无法调整通信频率，但是Viper TTL拥有数字频道配对功能，能够在引闪器和接收器之间建立独占连接，以避免拍摄时受到干扰。

雷公藤红素的配制：雷公藤红素溶于DMSO，并配成终浓度为10 mmol/L的母液，分装于1.5 mL EP管中，-20℃保存；棕榈酸的配制：称取0.0256 g棕榈酸，用无水乙醇定容至1 mL，得棕榈酸母液A(100mmol/L)；称取0.6 g无脂肪酸的BSA，用DMEM培养基定容至40 mL得1.5%的BSA溶液，过滤除菌；先将40 mL的1.5%的BSA溶液加热至55℃～60，然后将400 μL的100 mmol/L棕榈酸分4次加入40mL已预热的BSA溶液中，并继续在55℃～60℃水浴中直至棕榈酸完全溶解，制得棕榈酸母液B(1 mmol/L)，置于4℃备用。

1.2.2 实验分组

(1)雷公藤红素单独处理心肌细胞。CCK-8细胞实验：DMSO、PA(0.1mmol/L)、Cel(100、200、400、800、1600nmol/L)、DOX (1μmol/L)；蛋白印记实验：DMSO、Cel(100、200、400、800、1600nmol/L)、DOX。

(2)雷公藤红素联合PA处理心肌细胞。CCK-8细胞实验：DMSO、PA(0.1mmol/L)、PA+Cel(200、400nmol/L)；蛋白印记实验：DMSO、PA(0.1mmol/L)、PA+cel(200、400、800nmol/L)；DCFH-DA染色实验：DMSO、Cel(0.4mmol/L)、PA(0.1mmol/L)、PA+Cel(200、400nmol/L)；ROS酶标仪检测：DMSO、PA(0.1mmol/L)、PA+Cel(100、200、400、800nmol/L)

然而，当用低剂量雷公藤红素与棕榈酸同时作用心肌细胞时，仅200nmol/L的雷公藤红素就能够放大棕榈酸介导的心肌细胞活力下降作用，能够显著增加棕榈酸诱导的激活型caspase 3在胞内的积累，活化心肌细胞程序性凋亡信号途径。因此，低剂量的雷公藤红素可能在高血脂介导的心脏毒性作用中具有一定的协同毒性作用。

1.2.3 实验方法

[3]HUBERT H B，FEINLEIB M，MCNAMARA P M，et al.Obesity as an independent risk factor for cardiovascular disease：a 26-year follow-up of participants in the Framingham Heart study[J].Circulation，1983，67:968

2.在总体布局上协同推进文化发展。2001年12月11日，中国正式加入世界贸易组织。“入世”使中国的国内市场变成全方位开放的国际市场，这是经济社会发展的重要机遇，同时也面临如何适应国际化发展的严峻挑战。广州处于改革开放的前沿，城市建设和发展面临的国际挑战更是首当其冲。为了抓住机遇、应对挑战，广州把城市发展定位为国际主要大都会并从融入世界城市体系的战略考虑来制定城市发展规划，文化建设也开始按照国际化发展的要求来布局。

(2)蛋白印记检测β-actin和Cleaved caspase 3的表达水平。在100mm培养皿中种H9C2心肌细胞，待细胞生长至约80%汇合度时，根据实验设计进行分组，并给予相应处理；处理结束后，吸出培养基，用PBS洗涤3次，加入适量RIPA裂解液，4 ℃摇床上处理30min，用细胞刮刀将细胞刮下，转入1.5mL离心管内，4 ℃，13000r离心10min，将上清转移至已预冷的新1.5mL离心管中，同时做好分组标记。再用BCA法测定蛋白质含量，把蛋白浓度调至同等水平。等量(25μg)蛋白经SDS-PAGE分离后转膜至PVDF膜上，5%脱脂奶粉封闭2h，加入一抗(浓度为1∶1000)，水平摇床上4 ℃孵育过夜，用TBST洗涤3次，每次5 min，加入二抗(浓度为1∶5000)，室温下孵育1 h。ECL法显色，凝胶成像扫描系统拍照，并分析结果。采用Quantity One 4.6.2软件对条带进行定量分析，实验重复6次。

(3)DCFH-DA染色荧光显微镜照相法测定胞内活性氧簇(reactive oxygen species，ROS)水平。采用35 mm培养皿培养H9C2心肌细胞，待细胞汇合度达到约80%时，按照实验设计分组，雷公藤红素预处理1h，再加棕榈酸处理细胞8h，然后加入DCFA-DA染色液，细胞培养箱中孵育30min，吸出培养基，用PBS洗细胞3次，每次3min，最后加500 μL PBS缓冲液，荧光显微镜下随机照片记录5个视野，应用Image pro plus 6.0软件计算出绿色荧光的平均积分光密度(Integrated option density，IOD)，再对每组数据进行统计分析，实验重复6次。

(4)ROS酶标仪检测。采用6孔细胞培养板培养H9C2心肌细胞，实验方法同上，DCFA-DA染色后，在酶标仪上读数，激发波长为480/15，发射波长为510/25，再对每组数据进行统计分析，实验重复6次。

我和妈妈被眼前的美景吸引了，我们不禁停下车，来到了田野边，静静地欣赏火烧云。火烧云的颜色可多了。红色、金黄色、黑灰色、茄子紫、葡萄灰，还有的颜色看也看不出来，说也说不出名字。

综上所述，微摩尔以下低剂量雷公藤红素对心肌细胞活力及凋亡信号通路没有明显影响，但是能够显著增强高血脂介导的心肌细胞毒性作用。其可能的机制是通过进一步增强心肌细胞的氧化应激反应，导致胞内ROS的大量积累，从而进一步活化、放大Caspase信号通路依赖的细胞程序性凋亡。综合以上结论，在关注雷公藤红素改善脂代谢、糖代谢、抑制肥胖，治疗糖尿病及其肾病的同时，也应该关注雷公藤红素与高血脂对心脏的协同毒性作用，并进一步探索其可能的机制，为预防或降低将来雷公藤红素在临床应用上的毒副作用提供更多的理论依据。

1.2.1 药物配置

1.3 统计学处理

应用GraphPad软件进行统计数据处理与分析，所有原始数据都采用均数±标准差表示，组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 心肌细胞的指标测定

2.1.1 雷公藤红素单独处理心肌细胞

雷公藤红素浓度小于等于800nmol/L时，心肌细胞活力(P>0.05)没有明显变化，而当雷公藤红素浓度增加至1600nmol/L处理心肌细胞12 h后，心肌细胞活力(P<0.05)呈现明显下降。不同浓度雷公藤红素(100～1600nmol/L)处理心肌细胞24 h，蛋白质印迹检测结果显示(图1B)，雷公藤红素浓度在800nmol/L以内，心肌细胞内激活型Caspase 3的积累与DMSO组比较没有明显变化(P>0.05)，而当浓度增加到1600 nmol/L时，激活型 Caspase 3的积累(P<0.05)出现明显增加。见图1。

（1）吸收塔结构在相应荷载组合作用下不会发生整体失稳，仅会发生局部失稳。（2）第1模态临界荷载系数为20.1,安全裕量较大。（3）局部失稳位置也主要在烟道开孔部位附近，说明烟道开孔部位是整个吸收塔结构最为薄弱的地方。

 

A.不同浓度雷公藤红素对心肌细胞活力的影响，其中棕榈酸和阿霉素作为阳性对照，与DMSO组相比，*P<0.05；B.分析不同雷公藤红素对心肌细胞内激活型caspase 3积累的影响，与DMSO组相比，*P<0.05

图1 雷公藤红素对心肌细胞毒性评价

2.1.2 雷公藤红素联合PA处理心肌细胞

鉴于此,本文拟从这些常用词的造词和词义方面,结合构词理据对有借代意义的词作理论上的分析和描述,总结归纳常用词中借代意义的不同类型、规律,并就辞书中常用词借代义的释义体例及模式进行探讨,以供辞书编纂和修订时参考。

蛋白质印迹分析发现，采用不同浓度雷公藤红素预处理心肌细胞1 h，再加PA(0.1mmol/L)，两者同时处理心肌细胞24 h后，检测Caspase 3的表达水平。结果显示，低剂量的雷公藤红素(200nmol/L)和PA同时处理心肌细胞时，没有抑制，反而增加激活型 Caspase 3产生，雷公藤红素浓度增加到800nmol/L时，激活型Caspase 3表达量约是PA单独作用时的1.7倍，结果见图2，且数据差异具有统计学意义(P<0.05)。

 

A.低剂量雷公藤红素进一步下调棕榈酸诱导的心肌细胞活力，与DMSO组相比，*P<0.05，与PA组相比，$P<0.05；B.低剂量雷公藤红素增加棕榈酸诱导的心肌细胞凋亡过程中胞内激活型caspase 3的积累，与DMSO组相比，*P<0.05；与PA组相比，#P<0.05。

图2 低剂量雷公藤红素与棕榈酸的协同毒性作用促进心肌细胞凋亡

2.2 ROS水平检测

400nmol/L的雷公藤红素与棕榈酸同时刺激心肌细胞8 h后，采用DCFH-DA探针进行标记，荧光显微镜观察，结果见图3A(封二)，400nmol/L的雷公藤红素能够明显加重心肌细胞的氧化应激反应，所产生ROS约为棕榈酸单独作用的两倍；另外，采用不同浓度雷公藤红素与棕榈酸同时作用心肌细胞8 h，然后通过酶标仪检测DCFH-DA的荧光信号，结果显示见图3B(封二)，ROS的产量随着雷公藤红素浓度的增加而增加，当浓度达到800nmol/L时，荧光信号强度约是棕榈酸单独作用时的3倍。因此，氧化应激反应的增加可能是雷公藤红素协同高血脂介导心肌毒性的重要机制。

3 讨 论

肥胖性心肌病是肥胖症患者重要的并发症之一，高血脂诱导心肌细胞肥大，心脏结构性改变以及功能混乱，是肥胖性心肌病的重要风险因素。雷公藤红素在改善肥胖症、能量代谢方面显示出较好的治疗潜能，但存在可能的心脏毒副作用。在此期间，心脏毒副作用是由雷公藤红素诱发的还是与高血脂的协同毒性作用所致，目前还不清楚。本实验主要探讨雷公藤红素在改善脂肪代谢，治疗肥胖症期间与机体高血脂对心脏的影响及其机制。

首先分析单独使用雷公藤红素对心肌细胞的影响，筛选合适的给药浓度。结果显示，800nmol/L及以下浓度雷公藤红素对心肌细胞活力无明显影响，且心肌细胞程序性凋亡信号标记分子激活型caspase 3的产生并没有开始累积，说明低剂量雷公藤红素本身对心肌细胞没有显著毒副作用。而当雷公藤红素浓度增加至1600nmol/L，心肌细胞活力明显下降，caspase 3水平显著升高。因此，高浓度雷公藤红素可能具有心脏毒性作用。此结果与多篇文献报道基本一致，微摩尔及以上浓度雷公藤红素对细胞呈现明显毒性[10-11]。

供应链金融是现代供应链管理的重要组成部分。供应链管理可以保证供应链金融所使用的大批资金具有更高的使用效率，从而降低使用成本。具体来说就是通过为供应链内部核心金融企业以及上下游企业提供资金支持，降低其采购成本、库房成本、销售成本从而提高其整体工作竞争力。

进一步探索雷公藤红素和高血脂协同介导心肌细胞毒性作用的可能机制。通过胞内ROS的检测发现，低剂量雷公藤红素单独作用心肌细胞，增加胞内氧化应激应答的能力非常有限，当与棕榈酸同时作用时，ROS的产量约为棕榈酸单独作用时的2倍，此时，低剂量雷公藤红素显著增强了心肌细胞的氧化应激反应。另外，通过酶标仪检测不同浓度雷公藤红素与棕榈酸共同作用心肌细胞12 h后胞内ROS的产量，结果显示随着雷公藤红素浓度的增加，氧化应激反应越强，呈现雷公藤红素依赖性增加。因此，雷公藤红素增强高血脂诱导心肌细胞氧化应激反应可能是其与高血脂协同心肌毒性的重要机制之一。

（1）先要对工程所地区的土质环境进行科学分析，以在实际施工前掌握土质的物理性质。（2）为给后期的施工作业提供良好的科学依据，施工质量控制人员需对图纸物理性质进行检测，以确定土壤环境中的颗粒特性。（3）对于土壤颗粒较细的情况，相关人员可确定其弹模量增加。

心肌细胞(H9C2)购自中国科学院典型培养物保藏中心(CCTCC，武汉大学保藏中心)。DMEM培养基(规格500mL，货号10567014，含量：含40nmoloL-1L-谷氨酰胺、含4500mgoL-1葡萄糖)，胰蛋白酶(货号25200-056)，胎牛血清(FBS，货号16000-044)，青链霉素(货号10378-016)均购自美国Gibco公司，抗Cleaved Caspase 3抗体(货号#9661)，β-actin抗体(货号#4970)以及HRP标记的二抗均购自美国CST公司；DMSO(货号C6295-50ML)，棕榈酸(PA，货号P0500-25G)，雷公藤红素(Cel，货号C0869-10MG)购自美国Sigma公司；细胞活力检测试剂盒CCK-8(货号CK04)购自日本同仁公司；TekBio酶标仪(美国MD公司)，超净工作台(苏州佳宝净化)，二氧化碳培养箱(德国Eppendorf公司)，倒置显微镜(日本OLYMPUS公司)，高速冷冻离心机(德国Eppendorf)，化学发光凝胶成像系统(英国Syngene公司)等。

精神状态：因为他无钱返家，即便能回到家里也是孤苦伶仃，无依无靠，他待在北平也无法养活自己，他认为自己最好的归宿就是离开医院之后自杀。

[1]NCD Risk Factor Collaboration (NCD-RisC).Trends in adult body-mass index in 200 countries from 1975 to 2014：a pooled analysis of 1698 population based measurement studies with 19-2 million participants[J].Lancet，2016，387(10026):1377

[2]VECCHIE A，DALLEGRI F，CARBONE F，et al.Obesity phenotypes and their paradoxical association with cardiovascular disease[J].Eur J Intern Med，2017，doi:10.1016/j.ejim.2017.10.020

(1)CCK-8检测H9C2细胞增殖。H9C2细胞种于96孔细胞培养板中，每孔细胞数约3×103～6×103个，置于37 ℃，5% CO2培养箱中培养至细胞汇合度达到80%。根据实验设计，先加雷公藤红素预处理1 h，之后加高脂至终浓度为0.1 mmol/L，雷公藤红素终浓度为设定的所需要的浓度，设置空白孔(仅含培养基)，阴性对照(细胞，培养液)，继续培养直至需要的时长；处理结束后，吸出培养基，再用无血清DMEM培养基洗一次细胞，弃废液。后每孔再加100μL无血清DMEM和 10μLCCK-8溶液，37 ℃孵育2～3 h后，用酶标仪测定450nm处的OD值。细胞活力的计算：细胞活力(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)]×100%，其中，A(加药)为具有细胞、CCK-8溶液和加药的孔的吸光度，A(空白)为具有培养基和CCK-8溶液的孔的吸光度，A(0加药)为含细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度，实验重复6次。

党支部工作是一个动态的过程，会受到各种因素影响。做好医院党支部工作的创新是做好当前医院党建工作迫切需要解决的问题。2018年10月重庆市委办公厅印发了《关于加强公立医院党的建设工作的实施意见》中指出要提升公立医院基层党建工作水平。“互联网+”深入发展能更好地贯彻此文件精神，加强医院党的建设，以党建促业务工作，推进医院健康持续发展。

[4]KHANDEKAR M J，COHEN P，SPIEGELMAN B M.Molecular mechanisms of cancer development in obesity[J].Nat Rev Cancer，2011，11:886

[5]DENG F，WANG S，ZHANG L et al.Propofol through upregulating caveolin-3 attenuates post-hypoxic mitochondrial damage and cell death in H9C2 cardiomyocytes during hyperglycemia[J].Cell Physiol Biochem，2017，44(1):279

[6]YAO T，FUJIMURA T，MURAYAMA K，et al.Oxidative stress-responsive apoptosis inducing rrotein (ORAIP) play a critical role in high glucose-induced apoptosis in rat cardiac myocytes and murine pancreatic β-Cells[J].Cells，2017，6(4)：

[7]CHEN Y F，PANDEY S，DAY C H,et al.Synergistic effect of HIF-1 and FoxO3a trigger cardiomyocyte apoptosis under hyperglycemic ischemia condition[J].J Cell Physiol，2017，doi:10.1002/jcp.26235

[8]YU X，ZHAO Q，ZHANG X，ZHANG H， et al.Celastrol ameliorates inflammation through inhibition of NLRP3 inflammasome activation[J].Oncotarget，2017，8(40):67300

[9]CASCAO R，FONSECA J E，MOITA L F.Celastrol：A spectrum of treatment opportunities in chronic disease[J].Front Med (Lausanne)，2017，4:69

[10]LIU J，LEE J，SALAZAR HERDEZ M A，et al.Treatment of obesity with celastrol[J].Cell，2015，161(5):999

[11]VENKATESHA S H，MOUDGIL K D.Celastrol and its role in controlling chronic disease[J].Adv Exp Med Biol，2016，928:267

[12]BAI J P，SHI Y L，FANG X，et al.Effects of demethylzeylasteral and celastrol on spermatogenic cell Ca2+ channels and progesterone-induced sperm acrosome reaction[J].Eur J Pharmacol，2003，464(1)：9

[13]WANG S F，LIU K H，WANG X M，et al.Prelim inary study on cardiotoxicity of celastrol to zebrafish embryo[J].Chinese Pharmacological，2009,2(5)：634