子宫内膜异位症(endometriosis，EM)是一种常见的妇科良性疾病，是指具有生长功能的子宫内膜组织异位于宫腔被覆黏膜以外器官或组织的一种疾病，主要在卵巢、腹壁和深部组织，以及盆腔外，如肺部、脑部等部位[1]。育龄妇女EM的发病率为10%，而在不孕及盆腔疼痛的女性中其发病率则高达30%[2]。EM患者的症状主要表现为慢性盆腔疼痛、痛经、不孕，严重影响妇女的生活质量。目前，虽有多种关于EM发病的假说，但其具体的病理生理过程尚不明确。众多研究已表明免疫细胞在子宫内膜异位灶的形成过程中发挥着重要作用[3-5]。其中，巨噬细胞通过产生多种促炎及抗炎因子，参与免疫应答过程，调控子宫内膜异位灶的形成。根据功能及活化状态的不同，巨噬细胞可以分为M1型和M2型。M1型为抗炎型，主要通过产生大量促炎因子，如肿瘤坏死因子(TNF)等，发挥抵御病毒、细菌及真菌感染的作用，而M2型则在组织重塑、血管形成过程中扮演重要角色[6]。研究证实，CD68作为巨噬细胞的特异性标记物，可用于巨噬细胞的特异性识别；而CDl63作为M2型巨噬细胞表型标记物，普遍被用于巨噬细胞的分型。在既往的研究中，巨噬细胞在正常子宫内膜中的表达情况已得到证实，但在EM患者子宫内膜中的表达情况则仍存在争议。因此，本研究旨在通过探究EM患者在位及异位子宫内膜组织中巨噬细胞的分布情况，初步探索巨噬细胞在EM发病过程中的可能作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2014年2月至2016年8月在鄂州市妇幼保健院妇科经腹腔镜手术及病理学检查诊断为EM的93例患者为EM组，以同期因子宫肌瘤行手术治疗，且术后病理诊断为子宫肌瘤且子宫内膜正常的64例患者作为对照组。纳入标准：①术前3个月内未接受过激素类药物治疗或免疫抑制剂治疗；②无其他严重器质性病变；③月经周期规律。本研究已获我院医学伦理委员会批准，所有患者签署知情同意书。

1.2 研究方法

1.2.1 标本收集 术中行诊断性刮宫收取子宫内膜组织，同时收集EM患者的异位子宫内膜，经生理盐水冲洗和纱布蘸干后，将组织置于10%福尔马林中室温固定，6 h后常规脱水、石蜡包埋。

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1.3 统计学方法 应用SPSS20.0软件进行统计学分析，计数资料以率(%)表示，组间比较采用χ2检验，计量资料呈正态分布，以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2.3 两组患者子宫内膜组织中CD68阳性细胞数比较 子宫内膜腺体周围及基质均有CD68表达，为细胞膜/浆着色，见图1。统计学分析结果表明，无论是在增殖早、中、晚期还是分泌早、中、晚期，EM组患者在位及异位子宫内膜中的CD68阳性细胞数均明显高于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

1.2.3 HE染色 HE染色由我院病理科医师完成，具体过程如下：随机选取4 μm石蜡切片行常规HE染色，病理医师于显微镜下观察子宫内膜形态，确定组织分期。

2 结果

（2）合理控制施工进度。一方面要强化施工人员的工期意识，在施工前期做好施工计划，每个施工队要确立专属施工计划，明确完工日期，并在各个施工班组中设定施工日计划，确保工程进度处在合理有序的管理中，防止施工的盲目性和随意性。

1.2.2 免疫组化 免疫组化染色由我院病理科医师完成，具体过程如下：包埋蜡块做4 μm连续切片，随机选取两张切片做免疫组化染色。常规脱蜡水化后，3%过氧化氢浸泡玻片20 min，以封闭内源性过氧化物酶，再置于EDTA抗原修复液中微波处理10 min后，胎牛血清封闭30 min，以阻断非特异性染色。滴加鼠抗人CD68(1：200，Abcam，美国)、鼠抗人(CD163，1：500，Abcam，美国)抗体工作液，37℃水浴锅孵育1 h，磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗3遍，滴加二抗工作液(武汉博士德生物工程有限公司)，37℃水浴锅孵育30 min，PBS冲洗3遍。滴加DAB工作液显色，显微镜下观察阳性信号染色至棕黄色时终止染色。常规苏木素复燃，经氨水返蓝及梯度酒精脱水后，行树胶封片。

 

表1 两组患者的基本资料比较(±s)

  

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集中器作为无线通信的局端设备与无线采集器或者无线通信电表组成本地无线通信网络，形成以空间为传输介质的数据传输通道。无线集中器负责主动与每个无线采集器（无线通信电表）进行数据通信（采集），并通过远程通信网络将数据回传给主站系统。无线用电信息采集，系统结构如图所示。

2.1 两组患者的一般资料比较 EM组根据美国生育协会评分标准进行分期，Ⅰ～Ⅱ期28例，Ⅲ～Ⅳ期65例。患者年龄24～46岁，平均(33.89±4.43)岁。EM组患者的痛经比例为55.91%，明显高于对照组的35.94%，差异具有统计学意义(P＜0.05)；而其余基础资料，包括年龄、BMI、月经周期、经期等，两组患者比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，见表1。

1.2.4 图片分析 免疫组化和HE染色图片分析由我院病理科医师完成，具体过程如下：两人双盲评估免疫组化染色图片，要求每个视野组织覆盖面超过80%以上。每例患者随机选取5个视野，于高倍镜下计数每个视野中的阳性细胞个数，取两人平均值作为最终结果。

  

图1 CD68染色情况(×200)

 

注：A，对照组；B，EM组在位内膜；C，EM组异位内膜。

 

表2 两组患者子宫内膜组织中CD68阳性细胞数比较(±s)

  

对照组EM组在位内膜t值P值对照组EM组异位内膜t值P值22.44±10.3755.10±19.63-4.4550.00022.44±10.3771.10±9.74-10.550.00024.73±8.3348.72±18.38-4.0600.00024.73±8.3363.10±17.74-6.7010.00029.00±10.2750.24±20.95-3.1140.00429.00±10.2766.10±15.72-6.9080.00030.70±14.4546.21±16.23-2.5350.01730.70±14.4562.10±19.72-4.4320.00024.25±8.1446.78±18.19-4.0130.00024.25±8.1463.50±20.02-6.1470.00030.36±9.9350.18±22.67-2.6560.01530.36±9.9368.30±16.12-6.6460.000

2.4 两组患者子宫内膜组织中CD163阳性细胞数比较 子宫内膜腺体周围及基质均有CD163表达，为细胞膜/浆着色，见图2。统计学分析结果表明，无论是在增殖早、中、晚期还是分泌早、中、晚期，EM组患者在位及异位子宫内膜中的CD163阳性细胞数均明显高于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表3。

2.2 两组患者的HE染色分期比较 HE染色结果表明，EM组增殖早中期各10、18、17例，分泌早中晚期各19、18、11例；对照组增殖早中期各9、11、11例，分泌早中晚期各10、12、11例。

  

图2 CD163染色情况(×200)

 

注：A，对照组；B，EM组在位内膜；C，EM组异位内膜。

 

表3 两组患者子宫内膜组织中CD163阳性细胞数比较(±s)

  

对照组EM组在位内膜t值P值对照组EM组异位内膜t值P值18.78±10.4348.90±21.44-3.8200.00118.78±10.4369.30±12.13-9.6780.00019.81±11.9745.21±14.93-4.7720.00019.81±11.9759.90±15.13-7.4600.00020.73±9.4845.88±15.77-4.7450.00020.73±9.4865.60±20.13-6.8820.00021.30±13.8141.63±13.30-3.8630.00021.30±13.8159.42±16.53-6.2240.00017.08±11.9741.97±20.76-3.7450.00017.08±11.9763.42±18.53-7.6420.00022.45±10.5646.53±17.39-3.9250.00022.45±10.5667.12±16.53-7.5530.000

2.5 两组患者子宫内膜组织中CD163/CD68阳性细胞比例比较 统计学分析结果表明，无论是在增殖早、中、晚期还是分泌早、中、晚期，EM组患者在位及异位子宫内膜中的CD163/CD68阳性细胞比例均显著高于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表4。

在介入PPP项目前，应对项目的合法、合规性进行充分的识别，关注政策动态变化，规避合规风险。现阶段至少应保证以下方面的合规性：

 

表4 两组患者子宫内膜组织中CD163/CD68阳性细胞比例比较(±s)

  

对照组EM组在位内膜t值P值对照组EM组异位内膜t值P值0.84±0.040.89±0.06-2.1100.0490.84±0.040.97±0.18-2.1140.0490.80±0.070.93±0.14-2.8550.0080.80±0.070.95±0.21-2.2790.0150.71±0.110.91±0.23-2.6800.0130.71±0.110.99±0.24-3.6130.0010.69±0.150.90±0.26-2.3440.0270.69±0.150.96±0.23-3.3420.0020.71±0.140.90±0.31-2.5550.0160.71±0.141.00±0.29-3.2100.0030.74±0.150.93±0.25-2.1610.0430.74±0.150.98±0.25-2.7300.013

3 讨论

既往研究发现，EM患者的体液免疫和细胞免疫较健康人均增强，表明免疫因素在EM的发病中发挥着重要作用，而机体的免疫功能失调可能是EM的致病因素之一[5]。EM只有在炎性微环境中才能发挥其生物学行为，而起主要作用的炎性细胞是巨噬细胞。已有研究证实，EM患者腹腔中的免疫细胞分布存在异常，腹膜中的巨噬细胞处于高度激活状态，同时，EM患者异位灶中处于激活状态的巨噬细胞明显增多，且能通过分泌TNF-α、白介素、肝细胞生长因子、巨噬细胞来源生长因子等促炎因子，参与机体的炎症反应过程，促进EM的发生发展[5]。

既往研究表明，M1型和M2型巨噬细胞的异常分布可能与多种疾病的发生相关，如胶质瘤[7]、EM[8-9]等，且两种类型的巨噬细胞在疾病发生发展过程中的作用也不同。关于巨噬细胞在EM中的作用，Cominelli等[8]的研究表明，人类子宫内膜的巨噬细胞主要为M2型；Edin等[9]证实EM患者腹腔中CD163的表达显著增加；而Braun等[5]发现EM患者增殖早期巨噬细胞数目较正常组低，而在其他时期则无显著差异；Berbic等[10]的研究则表明，EM患者增殖期巨噬细胞数目明显增加，而Braun等[11]的研究又认为EM患者的巨噬细胞在整个月经周期都是增加的。从以上众多研究的结论中可发现关于巨噬细胞在EM患者在位及异位子宫内膜组织中的极化情况，目前尚缺乏统一的结论。本项研究结果表明，在EM患者不同时期的在位及异位子宫内膜组织中，CD68阳性细胞数明显升高，与Khan等[12]、Takebayashi等[13]的报道一致。此外，本研究还发现，不论是在位还是异位内膜，EM患者各期的M2型巨噬细胞比例均明显高于对照组，也就是说，EM患者子宫内膜组织中的巨噬细胞可能倾向于M2型，这与Takebayashi等[13]的研究结果相一致，而这种倾向可能是源于子宫内膜的感染。研究发现，与正常女性相比，EM患者经血存在大肠杆菌污染，且经血和腹膜液中细菌内毒素的水平显著增加[10]。有学者提出，子宫内膜的炎症可能来源于细菌，包括大肠杆菌、链球菌及支原体等[14-15]。此外，EM自身也可能是在位内膜巨噬细胞异常极化的原因之一，由于子宫腔通过输卵管与腹腔相通，EM产生的某些体液分子或物质可能通过腹腔进入宫腔，尤其是排卵期更甚。Kahn等[12]认为，EM患者经血中的前列腺素E2可以促进细菌的发育[16]。研究表明，IFN-γ是巨噬细胞向M1型转化的诱导因子之一，而IL-4、IL-10则是巨噬细胞向M2型转化的诱导因子，而在EM患者腹膜液中，IFN-γ的表达水平显著下降，IL-4、IL-10的表达则显著增加[12，1,7-18]。

综上所述，本研究表明，EM患者在位子宫内膜中巨噬细胞存在异常分布情况，且M2型巨噬细胞占优势。目前，关于巨噬细胞参与EM发生发展过程的具体机制仍不明确，需要更深入的研究进行探索。

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