我国的癌症病死率高达 68.01%，胃癌是最常见的恶性肿瘤之一[1]。影响胃癌生存期的因素很多，而浸润和转移是导致胃癌患者死亡的最主要原因。饥饿激素（ghrelin）是1999年日本科学家Kojima从大鼠胃内提取的一种肽，主要由胃底泌酸腺合成，并少量表达于心、脑、胰腺与脂肪组织等部位[2]。多项有关肿瘤细胞的研究表明，饥饿激素可以促进肿瘤细胞增殖，抑制细胞凋亡，促进癌细胞的运动和侵袭[3-6]。课题组前期研究发现，饥饿激素在胃癌细胞的增生中起着重要作用，但分子机制仍待进一步阐明[7]。因此，本研究旨在对饥饿激素在胃癌细胞转移中的作用机制做初步探讨。

1 材料与方法

1.1 试验耗材 超敏型ECL检测试剂盒购自凯基生物公司，乙酰化饥饿激素（纯度>99%）购自以色列ProSpec公司，Akt阻断剂哌立福新购自美国Selleck Chemicals公司，肌动蛋白（Actin）抗体购自碧云天生物技术研究所。

1.2 研究方法

1.2.1 细胞培养和处理 人胃癌高转移MKN-28细胞购自凯基生物公司。用含10%胎牛血清的F12培养基于37℃、CO2体积分数为0.05的细胞培养箱中培养。4～6 d传代1次，取对数成长期细胞进行试验。将MKN-28细胞分为ghrelin组、Akt阻断剂组及空白对照（normal control,NC）组。Ghrelin组用10-8M饥饿激素处理MKN-28细胞；Akt阻断剂组在10-8M饥饿激素处理30 min后添加5M Akt阻断剂哌立福新，与细胞共孵育24 h。

1.2.2 蛋白质印迹法取对数生长期胃癌MKN-28细胞，将提取的蛋白通过SDS-PAGE电泳后，电转至硝酸纤维素膜上。封闭2h后，加入一抗（美国CST公司），人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因（phosphataseand tensinhomologdeletedon chromosometen,PTEN）、磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated proteinkinaseB,p-Akt）、肌动蛋白（1:1000）、磷脂酰肌醇三激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）（1:500），4℃孵育过夜。二抗（北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司）孵育1 h，缓冲液再清洗后，超敏型 ECL检测试剂盒（凯基生物公司）显色。实验重复3次，检测 PTEN、PI3K、p-Akt及肌动蛋白的表达情况。

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1.2.3 划痕实验 取对数生长期胃癌MKN-28细胞，将处理好的细胞以每孔5×105个消化接种于六孔板，用10%胎牛血清的F12培养基培养，培养细胞达60%左右后用规格200L移液枪枪头在样本的细胞层划痕。磷酸盐缓冲生理盐水（phosphatebufferedsaline,PBS）冲洗后换取新鲜培养液，置于37℃、CO2体积分数为0.05的细胞培养箱中培养24h，检测细胞迁移能力。

1.3 统计学分析采用SPSS13.0软件进行统计分析，计数资料以频数表示，采用2检验；计量资料以均数±标准差（±s）表示，采用方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

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1.2.4 Transwell侵袭实验 取对数生长期胃癌MKN-28细胞，先将Matrigel基质胶放置4℃过夜融化，在小室中加入处理好的细胞后，结晶紫染色成功后计算数量并记录（倍数×200），检测细胞侵袭能力。

2 结果

2.3 饥饿激素通过PTEN/PI3K/Akt信号通路调节胃癌细胞转移 Westernblot结果显示，ghrelin组较NC组PTEN表达下调，PI3K和p-Akt表达上调，而Akt阻断剂哌立福新部分拮抗该作用。见图3。

  

图1 划痕试验检测细胞迁移能力（×100）

 

注：与NC组比较，*P<0.05；与ghrelin组比较，#P<0.05

  

图2 Transwell法检测细胞侵袭能力（×200）

 

注：与NC组比较，*P<0.05；与ghrelin组比较，#P<0.05

  

图3 PTEN、PI3K、p-Akt及Actin蛋白表达

 

注：与NC组比较，*<0.05；与ghrelin组比较，#<0.05

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2.1 饥饿激素促进胃癌细胞迁移将10-8M饥饿激素处理胃癌MKN-28细胞24 h后，通过划痕试验检测细胞迁移能力，发现ghrelin组较NC组划痕细胞间的长度缩短，提示细胞迁移能力升高，而Akt阻断剂哌立福新可以部分阻断该作用（P<0.05）。见图1。

2.2 饥饿激素促进胃癌细胞侵袭 将10-8M饥饿激素处理胃癌MKN-28细胞，ghrelin组侵袭细胞数较NC组增多，而Akt阻断剂可以部分阻断该作用（P<0.05）。见图2。

3 讨论

目前，早期发现胃癌的能力和技术已不断提高，但高龄胃癌患者术后仍有较高死亡率与并发症 [8]。已知饥饿激素是生长激素促分泌受体（growthhormone secretagoguereceptor，GHSR）的配体 [2]，GHSR有2个已知的mRNA亚型，GHSR1a和GHSR1b。GHSR1a是一种366个氨基酸组成的七跨膜结构域蛋白，是由饥饿激素介导多种生理效应的功能受体 [9]。有研究表明饥饿激素和GHSR1a在大肠癌组织和细胞系中均明显上调，下调GHSR1a后大肠癌细胞存活率明显降低[10]。

随着癌症的发生率和死亡率居高不下，越来越多的学者开始关注饥饿激素与癌症，包括胃癌。Tian等[4]在胃癌细胞中的研究中发现，饥饿激素通过GHSR/NF-B信号通路上调胃癌细胞转移因子基质金属蛋白酶-2的表达，促进肿瘤细胞的迁移和侵袭。本次研究进一步验证了这样的结果，通过划痕实验与Transwell实验检测胃癌细胞的迁移和侵袭能力，发现在ghrelin组中，无论细胞的迁移能力还是细胞的侵袭能力都增加，提示饥饿激素与胃癌的转移呈正相关。

PI3K/Akt信号通路在肿瘤的发生和发展中起到至关重要的作用。PTEN是PI3K的主要拮抗剂，是该途径的负调节因子，亦是一种具有良好特征的肿瘤抑制因子 [11]。通过蛋白质印迹法检测 PTEN/PI3K/p-Akt蛋白的表达，结果显示ghrelin组Akt/PI3K表达上调和PTEN表达下调。运用Akt阻断剂处理后，发现Akt阻断剂哌立福新可以部分阻断该作用，提示饥饿激素可能通过PTEN/PI3K/Akt通路调节胃癌细胞转移。

如今，城市高层建筑越来越多，其沉降引起的变形问题是一个值得关注的重点。对变形监测资料进行处理，建立数学模型进行预测分析，不同的模型有各自优缺点，但在众多模型中，灰色模型在沉降预测中有着独到之处[4]。针对传统GM（1，1）模型预测精度不高的情况，本文利用残差值进行修正，建立了残差GM（1，1）预测模型。通过实例分析发现，改进后的残差模型相比传统GM（1，1）模型，精度上有了更大的提高，预测结果更贴近真实值。因此，建立残差灰色模型对于判断建筑物的沉降变形，预测其沉降趋势有一定的意义。

今后有望将饥饿激素与其受体调节剂应用于抗肿瘤治疗中，对于放化疗不敏感的胃癌患者可能又多了一个新的治疗靶点。在胃癌的发生和发展过程中，尤其是对于了解胃癌转移和预后情况，可以提供一个新的检测方法。

参考文献

[1]陈万青，李贺，孙可欣，等.2014年中国恶性肿瘤发病和死亡分析 [J].中华肿瘤杂志，2018，40（1）：5-13.

[2]Kojima M,Hosoda H,Date Y,et al.Ghrelin is a growthhormone-releasing acylated peptide from stomach[J].Nature,1999,402(6762):656-660.

[3]Liu A,Huang C,Xu J,et al.Lentivirus-mediated shRNA interferenceofghrelinreceptor blocksproliferationinthecolorectal cancer cells[J].Cancer Med,2016,5(9):2417-2426.

[4]Tian C,Zhang L,Hu D,et al.Ghrelin induces gastric cancer cell proliferation,migration,and invasion through GHS-R/NF-kappa B signalingpathway[J].Mol Cell Biochem,2013,382(1-2):163-172.

[5]LienGS,LinCH,YangYL,etal.Ghrelininducescoloncancer cell proliferation through the GHS-R,Ras,PI3K,Akt,and mTOR signaling pathways[J].Eur J Pharmacol,2016,776:124-131.

[6]KrausD,Reckenbeil J,WenghoeferM,et al.Ghrelinpromotes oral tumorcell proliferationbymodifyingGLUT1expression[J].Cell Mol Life Sci,2016,73(6):1287-1299.

[7]Tian PY,Fan XM.The proliferative effects of ghrelin on human gastriccancerAGS cells[J].J DigDis,2012,13(9):453-458.

[8]丁皓，陆琪，朱捷，等.POSSUM评分预测高龄胃癌患者术后并发症和死亡风险的价值 [J].老年医学与保健，2016，22（1）：15-18.

[9]HowardAD,FeighnerSD,CullyDF,et al.Areceptorinpituitary and hypothalamus that functions in growth hormone release[J].Science,1996,273(5277):974-977.

[10]Liu A,HuangC,XuJ,et al.Lentivirus-mediatedshRNA interference of ghrelin receptor blocks proliferation in the colorectal cancer cells[J].Cancer Med,2016,5(9):2417-2426.

[11]Haddadi N,LinY,Travis G,etal.PTEN/PTENP1:regulating theregulatorofRTK-dependentPI3K/Akt signalling',new targets for cancer therapy[J].Mol Cancer,2018,17(1):37.