胃癌是全球第5大恶性肿瘤，在癌症相关死亡原因中排第3位[1-2]，基本治疗手段仍为手术切除和辅助化疗[3]。胃癌发生是环境因素和基因突变累积的结果 [4]，其发病的高峰年龄是70岁左右[5]。根据中国最新癌症统计数据显示，我国60岁以上的癌症患者中，胃癌的发病率和死亡率排第2位，新发病例和死亡病例分别占总体的68%和76%[6]。老年胃癌患者，往往存在潜在的心脑血管疾病，肝脏和肾脏等器官功能减退，因而手术治疗出现并发症概率较大，死亡率较高[7]。进一步探讨胃癌中异常表达的基因及其可能作用机制可以为老年胃癌患者的治疗提供新思路。

同源盒基因（homeoboxgene,HOX）家族编码带有60个氨基酸同源结构域的转录因子，通过调节包括细胞增殖、分化、凋亡及血管生成等过程，在胚胎发育和肿瘤发生中发挥重要作用[8]。同源盒基因A10（homeobox gene A10,HOXA10）是HOX基因家族中的一员，位于 7号染色体上[9]。前期研究发现HOXA10在胃癌中表达升高[10-11]，本研究在此基础上进一步探讨TCGA数据库中HOXA10在胃癌中的表达水平，观察下调 HOXA10表达水平后对裸鼠皮下成瘤能力的影响并探讨其可能的作用机制。

1 材料和方法

1.1 主要试剂 RPMI 1640培养基、胎牛血清、青-链霉素双抗、PBS、胰蛋白酶、RIPA裂解液、PMSF、嘌呤霉素及BCA试剂盒购自碧云天生物技术有限公司，ECL-HRP化学发光显影试剂盒购于Millipore公司，HOXA10 shRNA慢病毒和阴性对照购于上海吉凯基因化学技术有限公司。GAPDH抗体购于美国proteintech公司，HOXA10抗体购于美国GeneTex公司，Bcl-xL抗体购于美国CellSignalingTechnology公司。HRP标记的二抗羊抗兔和羊抗鼠均购于美国Jackson ImmunoReasearch Inc.公司。

1.2 研究方法

一般来说企业的管理会计与财务会计之间存在着非常紧密的关系，工作人员在进行财务会计工作的时候在很大程度上会涉及到管理会计所管理的内容，管理会计在工作的过程当中通常也会涉及到财务会计工作当中的内容。其实在实际工作当中财务会计和管理会计二者之间都拥有相互考核相互监督的功能，是紧密联系的关系。财务会计和管理会计在企业的工作当中一般都具有对生产经营信息的管理作用，但是在生产经营活动信息收集方面，管理会计能够通过众多渠道进行信息的管理，而生产活动的信息通常也就是对企业财务信息的计算。所以，只有将财务会计和管理会计很好地融合在一起调整企业内部信息架构，从而提高对于信息的有效利用。

在作文教学中，有部分学生对写作有畏难情绪，这就需要教师晓之以理，改变学生的畏惧心理。教师要想方设法做学生的思想工作，让学生明白写作是非常有趣的、有意义的事情。学生一旦明白写作的重要性与必要性，写作的心态就会随之转变。在作文教学中，晓之以理要达到好的效果需要老师本身具有一定的写作功底，老师可以拿出自己的一些作品跟学生分享，还可以跟学生交流写作心得，引领学生进行作文训练等。

1.2.3 HOXA10敲减稳转细胞株构建 采用 HOXA10 shRNA慢病毒和阴性对照病毒对BGC-823细胞进行转染并通过嘌呤霉素筛选得到 HOXA10敲减稳转胃癌细胞株。HOXA10shRNA干扰靶点为CACGGACAGACAAGTGAAA。实验分为空白对照组（BGC-823-Mock）、阴性 对照组（BGC-823-Ctrl）和实验组（BGC-823-sh-HOXA10）。

1.2.2 细胞培养与传代 BGC-823胃癌细胞购于中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心，培养基为含10%胎牛血清的 RPMI 1640培养基，置于37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。根据细胞生长状况2～3 d传代1次，取处于对数生长期的细胞进行实验。

1.2.1 TCGA数据库分析HOXA10在胃癌中的表达水平使用UALCAN网站(http://ualcan.path.uab.edu/index.html）对TCGA数据库进行生物信息学分析，以便从TCGA数据库中获得HOXA10在胃癌组织和正常组织中的表达情况。

2.1 TCGA数据库中HOXA10在胃癌组织中的表达水平 通过 UALCAN网站，针对 HOXA10基因分析TCGA数据库中胃腺癌数据集（STAD）的RNA-seq数据。结果显示时将表达水平标准化为Transcript per million（TPM），以利于比较。TPM数值越高，表示基因表达水平越高。分析结果可以通过以下地址获得：http://ualcan.path.uab.edu/cgi-bin/TCGAExResultNew2.pl genenam=HOXA10&ctype=STAD。胃腺癌数据集（STAD）中包括415例胃癌组织和34例正常组织，经统计分析显示 HOXA10在胃癌组织中的表达水平高于正常组织（<0.05）。见图 1。

2.3 HOXA10敲减后抑制胃癌细胞裸鼠皮下成瘤能力构建HOXA10表达抑制的稳转胃癌细胞后，开展裸鼠皮下成瘤实验，结果发现实验组细胞（BGC-823-sh-HOXA10）裸鼠皮下成瘤的重量和体积均小于阴性对照组，提示 HOXA10表达水平降低可以抑制胃癌细胞株BCG-823裸鼠皮下成瘤能力（<0.01）。见图 3。

2.2 HOXA10表达下调稳转细胞株构建 设立MOI=1、MOI=10和MOI=100共3个梯度，结果发现MOI=100时，慢病毒转染效果最好。通过嘌呤霉素筛选获得稳定转染的实验组细胞（BGC-823-sh-HOXA10）和阴性对照组细胞（BGC-823-Ctrl）。见图2。

2.4 HOXA10敲减后 Bcl-xL蛋白表达下调 分析HOXA10表达水平下调后，凋亡相关蛋白 Bcl-xL的表达情况有无改变，westernblot结果显示与空白对照组细胞（BGC-823-Mock）和阴性对照组细胞（BGC-823-Ctrl）相比，实验组细胞（BGC-823-sh-HOXA10）中Bcl-xL表达水平下降。见图4。

2 结果

1.2.4 裸鼠皮下成瘤6只4周龄雄性无胸腺BALB/c裸鼠购于中国科学院上海实验动物中心（SLACCAS，上海），在SPF级环境中饲养。采用自身对照，将阴性对照组细胞（BGC-823-Ctrl）和实验组细胞（BGC-823-sh-HOXA10）分别注射到同一只裸鼠左、右皮下，细胞注射数量均为5×106个。注射后21 d，颈椎脱臼法处死裸鼠，分离皮下瘤，称量肿瘤重量，测量长度和宽度。肿瘤体积计算公式：体积=0.5×长×宽2。

  

图1 TCGA数据库中HOXA10在胃癌中的表达水平

1.3 统计学分析 使用SPSS 22.0软件进行统计分析，数据以均数±标准差（±s）表示，采用 检验，<0.05为差异有统计学意义。

  

图2 慢病毒感染BGC-823细胞株的转染效率（MOI=100）

1.2.5 蛋白质印迹法（western blot） 选取对数生长期细胞，使用RIPA裂解液抽提细胞总蛋白，使用BCA试剂盒测定浓度。通过10%SDS-PAGE电泳，然后转印蛋白到PVDF膜上。5%脱脂牛奶室温封闭1h，加入一抗 HOXA10（1:1 000）、Bcl-xL（1:1 000）、GAPDH（1:5 000），4℃孵育过夜。1×TBST 10 min清洗3遍，根据一抗属性选择合适的二抗（1:10000），室温孵育1h，1×TBST10min再次清洗3遍后，使用ECL-HRP化学发光显影试剂盒测定蛋白表达水平。

  

图3 HOXA10表达下调对胃癌细胞裸鼠皮下成瘤能力的影响

互联网内容传播的调性也逐步出现四种类型。一是正性，代表着严密话语、严格逻辑、严肃氛围。二是亲性，例如“亲”、h5的自传播，突出的是亲悦话语、情感逻辑、轻松氛围。三是魔性，例如无厘头式的视频、鬼畜剪辑等，讲究的是混合话语、混搭逻辑、混沌氛围。这种调性的内容，政务新媒体较难采用。第四种是怼性，互联网中解构是常态，建构则难度较大。怼一怼和“红红脸、出出汗、照镜子、整衣冠”其实很接近。正性、亲性和怼性的不同配比，恰恰让网络呈现出不同的感受体验。具体内容调性的把握，需要根据实际情况趋利避害和去恶扬善。

  

图4 胃癌细胞株BGC-823中HOXA10表达抑制后Bcl-xL的表达水平

3 讨论

以往研究发现 HOXA10在多种肿瘤组织中呈现异常高表达，并与细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭和上皮-间充质转化等相关[12-14]。Li等[12]发现HOXA10表达升高后可以促进前列腺癌细胞的增殖能力，Cui等[13]认为HOXA10可能是通过激活p38MAPK信号通路促进胰腺癌细胞的迁移和侵袭。Zhang等[14]发现 ARK5/miR-1181/HOXA10轴激活后，可以促进卵巢癌细胞的上皮-间充质转化进程。

但HOXA10在胃癌中的研究较少。课题组前期研究发现HOXA10在胃癌中表达升高[10-11]，本次研究在此基础上首先采用生物信息学方法分析TCGA数据库中胃癌的相关数据，希望在更大范围对研究进行验证，结果提示 HOXA10在胃癌组织中的表达水平高于正常组织（<0.05），与前期研究结果相符。

通过构建 HOXA10敲减稳转胃癌细胞株BGC-823-sh-HOXA10并开展裸鼠皮下成瘤实验，结果发现 HOXA10敲减后，胃癌细胞株裸鼠皮下成瘤能力明显减弱，从动物实验水平证明抑制HOXA10表达水平能够削弱胃癌细胞株恶性生物学行为。

细胞增殖能力与细胞凋亡情况关系密切，目前发现多个分子参与凋亡，例如抗凋亡的Bcl-xL与Bcl-2和促凋亡的Bax和 Bak等[15]。其中抗凋亡蛋白BclxL，可通过阻断Bax对线粒体外膜的破坏从而发挥抗凋亡作用[16]。本研究为进一步分析 HOXA10参与胃癌可能涉及的相关机制，采用western blot检测胃癌细胞HOXA10表达抑制后Bcl-xL的表达水平是否发生改变。结果显示，胃癌细胞BGC-823中HOXA10表达抑制后，抗凋亡蛋白 Bcl-xL表达减少，提示HOXA10表达水平降低可能通过抑制抗凋亡蛋白BclxL的表达，进而促进细胞凋亡。

ATLAS软件的设计采用了先进的面向对象的设计模式，使用多态、虚拟继承与模板技术，在保证程序性能的前提下最大限度降低了程序模块之间的耦合性，具有非常高的可扩展性并且易维护。

综上所述，HOXA10在胃癌组织中表达异常升高，HOXA10表达水平降低后可以抑制胃癌细胞裸鼠皮下成瘤能力，HOXA10异常高表达可能通过抑制胃癌细胞发生凋亡从而促进胃癌恶性生物学行为。为进一步研究胃癌的发生发展相关机制提供有意义的数据。

每个省份调查至少覆盖40%地级市，每个地级市至少覆盖1个城区和1个县，覆盖小学、初中、高中全年级……近日，三部委组织开展儿童青少年近视调查工作，摸底掌握各地近视率基数。此前印发的《综合防控儿童青少年近视实施方案》要求，在核实2018年儿童青少年近视率基础上，从2019年起将近视防控纳入政府考核。这正是：

参考文献

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[2]Torre LA,Bray F,Siegel RL,et al.Global cancer statistics,2012[J].CA Cancer J Clin,2015,65(2):87-108.

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[11]Han Y,Lu S,Wen YG,et al.Overexpression of HOXA10 promotes gastric cancer cells proliferation and HOXA10(+)/CD44(+)is potential prognostic biomarker for gastric cancer[J].Eur J Cell Biol,2015,94(12):642-652.

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